[发明专利]检测马杜霉素的时间分辨荧光免疫试剂盒在审
| 申请号： | 201611141853.2 | 申请日： | 2016-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN108226499A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 洪霞;刘静;立雯馨 | 申请（专利权）人： | 丹阳亿太生物科技发展有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/577 | 分类号： | G01N33/577;G01N33/531;G01N33/533 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 212009 江苏省镇*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 制备 荧光免疫分析试剂 时间分辨荧光免疫分析 时间分辨荧光免疫 单克隆抗体 多孔包被板 抗体冻干品 霉素标准品 羊抗鼠抗体 样品前处理 检测试剂 特异性强 现场操作 包被原 缓冲液 灵敏度 免疫原 前处理 试剂盒 洗涤液 增强液 种检测 铕标记 荧光 回收率 分辨 应用 | ||
1.一种检测马杜霉素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其特征在于：由多孔包被板，缓冲液，马杜霉素标准品，马杜霉素的抗体冻干品，铕标记的羊抗鼠抗体，洗涤液和增强液所组成。
2.一种根据权利要求1所述检测马杜霉素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理，其特征在于：
(1) 将马杜霉素与牛血清白蛋白偶联，得到免疫原；
(2) 将马杜霉素与卵血清蛋白偶联，得到包被原；
(3) 用步骤(1)的免疫原免疫小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗马杜霉素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；
(4) 以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得抗马杜霉素的单克隆抗体
(5) 用步骤(2)的包被原包被固相载体；
(6) 将动物组织先经过酸解提取后，再过MAX柱净化，最后加入衍生试剂和催化剂进行处理，得到待测产物；
(7) 将步骤(6)的待检物进行测量荧光强度cps，对照标准曲线计算样品中的马杜霉素马杜霉素含量。
3.根据权利要求1所述检测马杜霉素的时间荧光免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述的固相载体是多孔包被板，采用96孔的多微孔包被板作为固相载体。
4.根据权利要求1所述检测马杜霉素的时间荧光分辨免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述的衍生试剂是丁胺。
5.根据权利要求1所述检测马杜霉素的时间分辨荧光免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述的催化剂是腈基磷酸二乙酯。
6.根据权利要求1所述检测马杜霉素的时间荧光免疫分析法试剂盒，其特征在于：所述步骤(6)和(7)具体为取包被有马杜霉素-OVA的微孔包被板，加入50 µL处理好的样品到各自的微孔中，加入50 µL以缓冲液稀释的马杜霉素抗体，25~37℃振荡0.5~1小时，洗涤液洗三次，加以缓冲液稀释的100 µL Eu3+-羊抗鼠抗体，25~37℃振荡0.5~1小时，洗涤液洗六次，加200 µL增强液振荡5分钟后测量荧光强度cps，从标准曲线计算样品中的马杜霉素含量。
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