[发明专利]吩嗪-1-羧酸作为水母毒素纤维蛋白原水解酶抑制剂的用途

说明书

本发明公开了吩嗪‑1‑羧酸作为水母毒素纤维蛋白原水解酶抑制剂的用途，所述的吩嗪‑1‑羧酸的结构式如式Ⅰ所示。吩嗪‑1‑羧酸通过抑制水母毒素纤维蛋白原水解酶水解纤维蛋白原的Bβ链起到抑制水母毒素纤维蛋白原水解酶活力的作用。本发明为筛选抗水母毒素的小分子化合物提供理论参考，也为水母蜇伤药物的研制奠定基础。

技术领域

本发明涉及海洋生物技术领域，具体涉及一种吩嗪-1-羧酸作为水母毒素纤维蛋白原水解酶抑制剂的用途。

背景技术

钵水母隶属于刺胞动物门，分布广泛。在中国北方沿海，主要有两种蜇人水母，分别是沙海蜇和霞水母，它们均属于钵水母纲。近十年来，水母数量激增，水母蜇人事件引起广泛关注。刺细胞是水母用于防卫和捕食的武器。当刺细胞接触皮肤，会立即释放出一根细长的刺丝，内含由蛋白和多肽组成的毒液，刺丝刺入皮肤组织即引起水母蜇伤。水母蜇伤症状主要为局部红肿，刺痒和疼痛，严重时会导致死亡。

水母毒素是导致水母蜇伤症状的化学基础。水母毒素成分复杂而且具有多种生物学活性，如溶血活性，神经毒性，心血管毒性，细胞毒活性等。此外，水母毒素还具有纤维蛋白原水解活性，可以快速清除纤维蛋白原的Bβ链。纤维蛋白原是与凝血功能有关的蛋白质，生理条件下，纤维蛋白原通过绑定血小板表面的GpIIb/IIIa蛋白从而将血小板连接起来，也可以被凝血酶转换为纤维蛋白从而在凝血级联反应中起作用。研究发现，纤维蛋白原也是一些生物毒素(如蛇毒)作用于有机体的重要靶点。如在蛇咬伤过程中，蛇毒中的纤维蛋白水解酶通过局部毛细血管进入血液循环系统，降解体内的纤维蛋白原，造成患者局部凝血障碍，血流不止，从而加重患者的中毒程度。水母毒素能够降解纤维蛋白原，表明毒素中的纤维蛋白原水解酶也可能在水母蜇伤中起作用。

吩嗪-1-羧酸可抑制多种农业病原真菌，主要作为抗菌剂应用。我们在实验中发现，吩嗪-1-羧酸可以有效抑制水母毒素中的纤维蛋白原水解酶。这一发现，不仅拓宽了吩嗪-1-羧酸的应用范围，也为筛选抗水母毒素的小分子化合物提供参考，同时为研制水母蜇伤药物奠定基础。

发明内容

本发明的目的是提供吩嗪-1-羧酸作为水母毒素纤维蛋白原水解酶抑制剂的用途。

本发明实现目的的方案如下：

吩嗪-1-羧酸作为水母毒素纤维蛋白原水解酶抑制剂的用途，所述吩嗪-1-羧酸的结构式如式Ⅰ所示。

优选的，所述抑制剂配制方法：将吩嗪-1-羧酸用二甲基亚砜(DMSO)溶解后，再用50mMTris-HCl(pH 7.6)缓冲液稀释制得。

吩嗪-1-羧酸抑制水母毒素纤维蛋白原水解酶活力通过电泳法测定。

吩嗪-1-羧酸用二甲基亚砜(DMSO)溶解后，再用50mM Tris-HCl(pH 7.6)缓冲液稀释得到吩嗪-1-羧酸溶液。然后向水母毒素溶液中加入吩嗪-1-羧酸溶液，使吩嗪-1-羧酸与水母毒素(以蛋白计)的质量比大于或等于0.1:1，37℃条件下预处理30min后，再加入底物纤维蛋白原溶液启动反应。反应6h后，取20μl反应混合物置于冰上，并立即加等体积的2×Sample缓冲液(含β-巯基乙醇)终止反应。样品经100℃煮沸10min后，取20μl加至上样孔中，然后在12％SDS-PAGE电泳胶上电泳。电泳完成，取出凝胶，并置于0.25％考马斯亮蓝中染色3h后，用脱色液(甲醇：水：冰乙酸＝5:4:1)对凝胶进行脱色。获得清晰条带后，通过检查纤维蛋白原条带变化来分析吩嗪-1-羧酸对水母毒素纤维蛋白原水解酶活力的抑制。

本发明的优点：

1)、本发明提供了吩嗪-1-羧酸的新用途，吩嗪-1-羧酸对水母毒素纤维蛋白原水解酶具有抑制作用，吩嗪-1-羧酸通过抑制水母毒素纤维蛋白原水解酶水解纤维蛋白原的Bβ链起到抑制水母毒素纤维蛋白原水解酶活力的作用，因此吩嗪-1-羧酸可作为水母毒素纤维蛋白原水解酶的抑制剂使用。