[发明专利]多酶催化制备纤维二糖的方法在审
| 申请号： | 201611136432.0 | 申请日： | 2016-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN108611386A | 公开（公告）日： | 2018-10-02 |
| 发明（设计）人： | 张以恒;钟超 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12P19/24 | 分类号： | C12P19/24;C12P19/18;C12P19/12 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300308 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 纤维二糖 制备 酶反应体系 酶催化 得率 规模化生产 原料转化率 底物转化 过程优化 新型高温 转化效率 蔗糖 底物 酶剂 体外 催化 优化 | ||
1.一种纤维二糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）以蔗糖为底物，加入蔗糖磷酸化酶、葡萄糖异构酶、纤维二糖磷酸化酶建立多酶反应体系，进行酶催化反应；（2）反应后体系中包括纤维二糖、蔗糖和少量中间产物，将反应产物分离纯化，即得。
2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：重组蔗糖磷酸化酶是来源于高温厌氧菌
3.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述多酶反应体系还含有以下成分：无机盐缓冲液、二价镁离子、无机磷酸盐等；其中，所述磷酸盐优选为磷酸二氢钠；更优选的，磷酸盐浓度控制在10 mM左右每100 mM蔗糖。
4.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述多酶分子机器催化体系所用酶具有较好的热稳定性，整体催化过程可以在较高温度条件下进行，优选温度40~60℃，实现纤维二糖高效率转化。
5.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述多酶反应体系优选的酶量配比，即蔗糖磷酸化酶、葡萄糖异构酶、纤维二糖磷酸化酶的酶量比为0.5:1.0:1.5（U/mL）。
6.按照权利要求2所述的酶制备方法，蔗糖磷酸化酶基因是基于菌株
7.按照权利要求2所述的酶制备方法，更优选的蔗糖磷酸化酶基因是通过向密码子优化后的基因中选择性插入同义稀有密码子改造而得，可进一步提高该酶在大肠杆菌BL21(DE3)中的可溶性表达。
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