[发明专利]一种赭曲霉毒素A快速检测方法

说明书

本发明提供了一种赭曲霉毒素A快速检测方法，包括如下的步骤：在微孔硅纳米材料中负载大量的亚甲基蓝分子；用赭曲霉毒素A的核酸适配体封闭负载了亚甲基蓝分子的微孔硅纳米材料；加入赭曲霉毒素A样品后，由于其与核酸适配体间发生特异性结合，核酸适配体从微孔硅纳米材料表面脱落，亚甲基蓝分子得以释放。借助丝网印刷电极和便携式电化学检测仪检测上清液中亚甲基蓝的电信号，得出其与赭曲霉毒素A浓度之间的关系曲线，从而实现赭曲霉毒素A的间接定量检测。在此基础上，引入酶的信号放大作用。核酸酶加入后选择性破坏赭曲霉毒素A和核酸适配体间形成的G‑四联体结构，赭曲霉毒素A又以游离状态回到溶液中，再次重复上述过程。如此往复可以大大提高检测的灵敏度。本方法中的传感器构建过程和检测过程不需要昂贵的仪器和试剂，操作简单，灵敏度很高。

技术领域

本发明涉及一种赭曲霉毒素A快速检测方法，具体涉及一种基于微孔硅纳米材料、核酸酶循环信号放大和丝网印刷电极的赭曲霉毒素A快速检测方法。

背景技术

赭曲霉毒素(ochratoxins)是由多种曲霉和青霉菌产生的一类化合物，依其发现顺序分别称为赭曲霉毒素A(OTA)、赭曲霉毒素B(OTB)和赭曲霉毒素C(OTC)。它是继黄曲霉毒素后又一个引起世界广泛关注的霉菌毒素。其中毒性最大、分布最广、产毒量最高、对农产品的污染最重、与人类健康关系最密切的是OTA。它是一种无色结晶化合物，可溶于极性有机溶剂和稀碳酸氢钠溶液，微溶于水，有很高的化学稳定性和热稳定性。这种毒素是由多种生长在粮食(小麦、玉米、大麦、燕麦、黑麦、大米和黍类等)、花生、蔬菜(豆类)等农作物上的曲霉和青霉产生的。被动物摄入后，这种毒素主要侵害动物肝脏与肾脏、引起肾脏损伤；大量的毒素也可能引起动物的肠黏膜炎症和坏死，甚至可能产生致畸、致癌、致突变和免疫抑制作用。残留在动物体内的OTA通过食物链进入人体后，其在人体内的代谢非常慢，半衰期长达30多天，对人类健康会产生很大的危害作用。因此，多个国家制定了相关的卫生标准。例如，瑞士规定猪和禽配合饲料中OTA的允许量分别不得超过200μg/kg和1000μg/kg。美国也正在制订有关条例。国内GB 2761-2011规定谷物、豆类及其制品中OTA的允许量不得超过5μg/kg。目前，检测OTA的经典和权威方法主要有薄层色谱法和高效液相色谱法。尽管这些方法灵敏度高、准确性高，但都需要复杂、昂贵的仪器，专业的操作人员，且耗时较长。因此，有必要发展简单、快速、高灵敏、适合现场检测的新方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种OTA快速检测方法，本方法中的传感器构建过程和检测过程不需要昂贵的仪器和试剂，操作简单，灵敏度很高。本发明通过以下的技术方案来实现：

本发明还提供了一种OTA快速检测方法，包括如下的步骤：

(1)在微孔硅纳米材料中负载大量的亚甲基蓝分子；

(2)通过核酸适配体将负载了大量亚甲基蓝分子的微孔硅纳米材料封闭；

(3)加入OTA样品和核酸酶的混合溶液；

(4)借助丝网印刷电极和便携式电化学检测仪，检测上清液中亚甲基蓝的电信号，间接实现OTA的定量检测；OTA的浓度正比于亚甲基蓝分子的浓度。

其中，步骤(3)因OTA与核酸适配体间很强的特异性结合，核酸适配体从微孔硅纳米材料表面脱落，亚甲基蓝分子得以释放。同时加入核酸酶DNase I，因核酸酶能选择性破坏OTA与适配体间形成的G-四联体结构，OTA又以游离状态回到溶液中，再次重复上述过程。如此往复，可提高检测的灵敏度。

同时，本发明中所述方法步骤(4)还可以使用血糖仪检测葡萄糖的浓度，来检测OTA的浓度。

优选的，一种OTA快速检测方法，具体包括如下的步骤：