[发明专利]一种赭曲霉毒素A快速检测方法有效
| 申请号： | 201611132457.3 | 申请日： | 2016-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN106706737B | 公开（公告）日： | 2019-03-26 |
| 发明（设计）人： | 王利华;曾令文;王梦;韩艳云;杨保国;吴文辉;胡志娟 | 申请（专利权）人： | 武汉市农业科学技术研究院农业环境安全检测研究所（武汉市农业科学技术研究院中心实验室） |
| 主分类号： | G01N27/30 | 分类号： | G01N27/30;G01N27/26 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 430065 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 赭曲霉毒素A 核酸适配体 硅纳米材料 亚甲基蓝 微孔 快速检测 灵敏度 检测 电化学检测仪 丝网印刷电极 信号放大作用 特异性结合 选择性破坏 表面脱落 定量检测 关系曲线 联体结构 游离状态 传感器 核酸酶 甲基蓝 上清液 中负载 构建 封闭 释放 引入 重复 | ||
1.一种赭曲霉毒素A快速检测方法，其特征在于，包括以下的步骤：
(1)在微孔硅纳米材料中负载大量的亚甲基蓝分子，制得负载大量亚甲基蓝分子的微孔硅纳米材料；
(2)通过核酸适配体将步骤(1)所得负载了大量亚甲基蓝分子的微孔硅纳米材料封闭；
(3)加入赭曲霉毒素A样品和核酸酶的混合溶液；
(4)借助丝网印刷电极和便携式电化学检测仪，检测上清液中亚甲基蓝的电信号，间接实现赭曲霉毒素A的定量检测；赭曲霉毒素A的浓度正比于亚甲基蓝分子的浓度。
2.基于权利要求1的一种赭曲霉毒素A快速检测方法，其特征在于，包括以下的步骤：
(1)将10mg微孔硅纳米材料加入2mL含有30mg mL-1亚甲基蓝的10mM，pH 7.0的Tris-HCl缓冲液中，室温过夜轻微振荡，使亚甲基蓝分子充分扩散到微孔硅纳米材料的孔中；
(2)将20μL，200μM核酸适配体溶液加入到步骤(1)所得悬浮液中，4℃轻微搅拌8h后，用10mM，pH 7.0的Tris-HCl缓冲液离心和洗涤3次以上，以除去微孔硅纳米材料表面物理吸附的亚甲基蓝，最后将材料分散到2mL Tris-HCl缓冲液中；
(3)在400μL步骤(2)所制得的悬浮液中，加入400μL赭曲霉毒素A样品和核酸酶的混合液，从0到2000nM中选取10个以上的浓度，室温下轻微振荡孵育2h后，将产物在5000rpm下离心5min；
(4)取50μL上清液滴于丝网印刷电极上，用差示脉冲伏安法进行后续的电化学检测，具体参数为：脉冲电压范围为-500—0.0mV，脉冲幅度50mV，脉冲宽度200ms。
3.如权利要求2所述的赭曲霉毒素A快速检测方法，其特征在于：步骤(1)和步骤(2)中所述微孔硅纳米材料的质量为10mg；所述亚甲基蓝和核酸适配体的浓度分别为30mg mL-1和200μM；所述缓冲液为10mM，pH 7.0的Tris-HCl缓冲液。
4.如权利要求2所述的赭曲霉毒素A快速检测方法，其特征在于：步骤(3)中所述核酸酶为DNase I。
5.如权利要求2所述的赭曲霉毒素A快速检测方法，其特征在于：步骤(4)中所述电化学检测方法为差示脉冲伏安法，具体参数为：脉冲电压范围为-500—0.0mV，脉冲幅度50mV，脉冲宽度200ms；所述用于电化学检测的上清液的体积为50μL。
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