[发明专利]伊木萨克片作用于异常黏液质证与阳痿病证模型靶点蛋白及其筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及伊木萨克片作用于异常黏液质证与阳痿病证模型靶点蛋白及其筛选方法。

背景技术

维吾尔医(维医)学是祖国传统医学中重要组成部分，维医学体液论认为，人体由胆液质、血液质、黏液质和黑胆质4种体液质组成，上述4种体液质的动态平衡是机体健康的生理基础，而某一种体液质的量或/和质的变化，引起体液质平衡失调，产生一种异常体液质证(证候)，与多种疾病的发生存在因果关系。体液病理学(体液论)是维医理论根基，其认为4种体液中，黏液质体液属性湿寒，常易因生活、饮食与环境因素、工作压力、缺乏运动等原因导致体内体液平衡遭到破坏，黏液质体液发生改变，产生异常黏液质，致代谢水平降低，产物蓄积体内，进而导致病理性改变，引发相关疾病。临床研究证实，异常黏液质证(Abnormal Phlegm)在阳痿(阴茎勃起功能障碍)、早泄、少弱精症、卵巢早衰、不孕不育等生殖疾病、肥胖症、高脂血症等代谢性疾病和心血管疾病发生过程中，处于主导地位，可能也是肿瘤、糖尿病、高血压等复杂性疾病发生早期的主要证型。阴茎勃起功能障碍(erectile dysfunction，ED)，又称阳痿，是指男子阴茎不能勃起及不能维持勃起而完成满意的性生活，属于维医优势病种。

伊木萨克片作为针对异常黏液质型阳痿、早泄的国药准字号经典维药(批号Z65020144)，以显著的临床疗效著称，其具有800年的历史，且早已纳入维吾尔医学院校教材中，公认性与科学性强。其以维医辨证论治体系为指导，广泛用于维医临床，目前也已用于疆内外各大医院男科临床，但因其现代医学作用机制尚不清楚，作用靶点更是未见报道，导致其在现代医学(西医)医院使用中缺乏理论与使用指导，不能更好的服务于全国各族患者。

异常黏液质型阳痿病证并非是单一生殖器官即阴茎组织的的疾病，而是全身性疾病，因此需要我们用整体观念，从全身的视野思考、研究与防治。伊木萨克片作为与异常黏液质型阳痿病证对应的复方维药，在辩证的基础上使用，并通过发挥补肾壮阳，填精固真之功效实现治疗效果。

维医辨证分型的起点和核心是维医“体液论”，其出发点是人体内在体液动态变化的外在表现，而维医药学所推崇的辨证施治也是依据个体的整体水平上发生的体液表型差异，这与系统生物学整体研究思路不谋而合。故，本研究，本研究在建立异常黏液质证候与病证结合动物模型，并进行维药伊木萨克片治疗性干预基础上，开展了血清和阴茎平滑肌组织的蛋白质组学研究，建立了维药伊木萨克片治疗异常黏液质证与异常黏液质型阳痿病证大鼠相关血清药物靶点蛋白体系，为从维医和现代医学结合角度进一步揭示伊木萨克片作用机制，以及为基于维药伊木萨克片的新药开发及二次开发奠定基础，对于维医诊疗的标准化和现代化具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供伊木萨克片作用于异常黏液质阳痿病证大鼠后血清和阴茎平滑肌组织药物靶点蛋白及其筛选方法，通过采用iTRAQ技术获得的血清和阴茎平滑肌组织的所有差异蛋白，然后通过本专利丰富的维吾尔医学知识制定了候选差异蛋白的筛选方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了伊木萨克片药物靶点蛋白的筛选方法，包括以下步骤：

1)提供正常对照组(N组)、异常黏液质证候组(ZM组)，异常黏液质证候药物组(ZY组)、异常黏液质型病证组(BM组)和异常黏液质型病证药物组(BY组)，大鼠，对BY组和ZY组大鼠用伊木萨克片喂食2周，N组、ZM组和BM组大鼠喂食水；

2)采集所述步骤1)得到的五组大鼠的全血，分离后得到血清；

取所述步骤1)得到五组大鼠的阴茎平滑肌组织；

3)从所述步骤2)得到的血清和阴茎平滑肌组织中提取蛋白质，检测，得到已知浓度的蛋白质；

4)将所述步骤3)中得到的蛋白质用iTRAQ标记试剂盒标记后纯化，得到纯化后肽段；

5)将所述步骤4)得到的纯化后的肽段经质谱检测后得到指纹图谱，将所述指纹图谱在PD软件中筛选，将所述筛选后的谱图用Mascot搜索，根据得到的搜索结果和筛选后的谱图进行定量分析，将得到的分析数据在大鼠数据库中检索，获得大鼠血清差异蛋白质和阴茎平滑肌组织差异蛋白质；

6)将所述步骤5)中得到的血清差异蛋白质和阴茎平滑肌组织差异蛋白质进行伊木萨克片药物靶点蛋白的筛选。

优选的，所述伊木萨克片的药物活性成分的质量浓度为250mg/kg，

优选的，所述喂食伊木萨克片的频率为每日1～2次。