[发明专利]伊木萨克片作用于异常黏液质证与阳痿病证模型靶点蛋白及其筛选方法

权利要求书

1.伊木萨克片药物靶点蛋白的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提供正常对照组(N组)、异常黏液质证候组(ZM组)、异常黏液质证候药物组(ZY组)、异常黏液质型病证组(BM组)和异常黏液质型病证药物组(BY组)，N大鼠，对BY组和ZY组大鼠用伊木萨克片喂食2周，BM组、ZM组和N组大鼠喂食水；

2)采集所述步骤1)得到的五组大鼠的全血，分离后得到血清；

取所述步骤1)得到五组大鼠的阴茎平滑肌组织；

3)从所述步骤2)得到的血清和阴茎平滑肌组织中提取蛋白质，检测，得到已知浓度的蛋白质；

4)将所述步骤3)中得到的蛋白质用iTRAQ标记试剂盒标记后纯化，得到纯化后肽段；

5)将所述步骤4)得到的纯化后的肽段经质谱检测后得到指纹图谱，将所述指纹图谱在PD软件中筛选，将所述筛选后的谱图用mascot搜索，根据得到的搜索结果和筛选后的谱图进行定量分析，将得到的分析数据在大鼠数据库中检索，获得大鼠血清差异蛋白质和大鼠阴茎平滑肌组织差异蛋白质；

6)将所述步骤5)中得到的血清差异蛋白质和阴茎平滑肌组织差异蛋白质进行伊木萨克片药物靶点蛋白的筛选；

所述异常黏液质血清证候组大鼠药物靶点蛋白的差异蛋白的筛选具体是：

将所述步骤6)中得到的BM组与N组蛋白质相比较，得到BM/N的差异蛋白质；将ZM组与N组的蛋白质相比较，得到ZM/N的差异蛋白质；将所述ZY组与ZM组的蛋白质相比较，得到ZY/ZM的差异蛋白，统计BM/N、ZM/N和ZY/ZM差异蛋白的同蛋白的种类和数量，得到伊木萨克片作用于异常黏液质证候组大鼠后的血清药物靶点蛋白；

所述异常黏液质型阳痿病证组大鼠血清和阴茎平滑肌组织药物靶点蛋白的差异蛋白的筛选具体是：

将所述步骤6)中得到的BM组与ZM组蛋白质相比较，得到BM/ZM的差异蛋白质；将BM组与N组的蛋白质相比较，得到BM/N的差异蛋白质；将所述BY组与BM组的蛋白质相比较，得到BY/BM的差异蛋白，统计BM/ZM、BM/N和BY/BM差异蛋白的同蛋白的种类和数量，得到伊木萨克片作用于异常黏液质型阳痿病证组大鼠后的血清和阴茎平滑肌组织药物靶点蛋白。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述伊木萨克片中药物活性成分的质量浓度为250mg/kg，所述喂食伊木萨克片的频率为每日1～2次。

3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤1)中正常对照组在常规环境中饲养，喂食的环境温度为18～22℃，所述喂食环境的相对湿度为40～60％；造模组的喂食的环境温度为8～12℃，所述喂食环境的相对湿度70～80％；所述步骤1)中正常对照组为普通饲料，造模组喂食饲料为湿寒性饲料。

4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤2)中分离得到血清的方法具体是：将新鲜大鼠全血立即置4℃环境，30～40min后以3000～3500rpm的速度离心5～10min，将得到的上清液在4℃条件下，以3000～3500rpm的速度再次离心，得到血清；所述步骤2)得到阴茎平滑肌组织的方法具体是：从根部取阴茎平滑肌组织，洗去血渍，并除去残余皮肤、筋膜，取上段阴茎平滑肌组织，放置于冻存管中放置于-80℃超低温冰箱备用。

5.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤3)中检测包括蛋白质的完整性和蛋白质的含量的测定。

6.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述伊木萨克片靶点蛋白包括异常黏液质大鼠证候组的血清药物靶点蛋白、异常黏液质大鼠血清和阴茎平滑肌组织病证组药物靶点蛋白。

7.权利要求1所述方法筛选得到的伊木萨克片药物作用于异常黏液质证候动物模型的血清的靶点蛋白，其特征在于，包括下列蛋白质种类：血管紧张素原、T-激肽原1、α-1-酸性糖蛋白、甲状腺素运载蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制剂A3L、丝氨酸蛋白酶抑制剂A3K、α-2-巨球蛋白、羧酸酯酶1C、血清铁传递蛋白、α-1-3抑制剂、α-1-抗蛋白酶、血红素结合蛋白、血清淀粉样物质P、β-2-糖蛋白1、肌红蛋白-1、血小板白细胞c激酶底物、被控多泡体蛋白5、α-1-巨球蛋白、胎球蛋白-B、GRAM结构域的蛋白1A和N-乙酰神经氨酸-9-磷酸酶。