[发明专利]用于检测丁酰胆碱酯酶的近红外半菁类荧光探针及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及丁酰胆碱酯酶的检测领域，公开了一种用于检测丁酰胆碱酯酶的近红外半菁类荧光探针及其制备方法和应用，具体的，所述近红外半菁类荧光探针具有式(1)所示的结构。所述方法包括在亲核反应条件和缚酸剂存在下，在有机溶剂中，将式(2)所示的化合物与环丙基甲酰氯接触。应用包括：在检测丁酰胆碱酯酶的活性中的应用，一种丁酰胆碱酯酶的活性的检测方法和检测试剂盒。本发明的近红外半菁类探针化合物用于与羧肽酶Y活性检测有关的应用时，灵敏度高、选择性好、荧光强度的变化大易于检测，稳定性更高、使用更方便、价格更低廉。

技术领域

本发明涉及丁酰胆碱酯酶的检测领域，具体地，涉及一种近红外半菁类荧光探针，该近红外半菁类荧光探针的制备方法和在检测丁酰胆碱酯酶的活性中的应用，以及一种丁酰胆碱酯酶的活性的检测方法和丁酰胆碱酯酶活性的检测试剂盒。

背景技术

丁酰胆碱酯酶(BChE)主要以乙酰胆碱酯酶的一种同工酶存在于生物体内，它是由肝脏合成的一种非特异性酯酶，由于该酶在肝脏中合成后立即释放到血浆中，因此血清中BChE活性是测定肝细胞蛋白质合成功能的灵敏指标。随着检测技术和临床诊疗水平的不断提高，丁酰胆碱酯酶除了用于评估肝脏储备功能，还扩展到恶性肿瘤、神经系统性疾病、心血管疾病、代谢综合症等众多疾病的检测和诊断领域当中。此外，在临床中，测定血清胆碱酯酶活性也是协助诊断有机磷化合物(如有机磷毒气、有机磷农药)和可卡因等中毒的重要途径。

现有测定丁酰胆碱酯酶活性的方法主要有三种。第一种是用紫外吸收光谱法(即Ellman方法)来测试待测样品中的胆碱酯酶活性，主要是通过以硫代乙酰胆碱或硫代丁酰胆碱作为底物，所生成的硫代胆碱与Ellman试剂(5,5-二硫代双-2-硝基苯甲酸)生成黄色物质。第二种是用荧光光谱法来测试待测样品中的胆碱酯酶活性，主要是通过以硫代乙酰胆碱或硫代丁酰胆碱作为底物，利用识别硫代胆碱的荧光探针进行间接监测酶的活性。第三种直接用同位素标记的天然底物乙酰胆碱或丁酰胆碱，直接测定待测样品中的胆碱酯酶活性。

以上方法中，前面两种属于间接方法，容易造成误差；第三种方法虽然是直接方法，但是操作过程较为复杂，且均需要昂贵的大型仪器与检测费用才能实现，也对安全造成很大的压力。不仅如此，上述三种方法均不能区分丁酰胆碱酯酶和乙酰胆碱酯酶，因为所测得的活性是所有胆碱酯酶的总活性。

因此，设计开发基于有机小分子作为直接的底物型荧光探针，进而建立灵敏、简单、经济的特异性丁酰胆碱酯酶活性检测方法是非常迫切和必要的。然而目前为止，国内外较少关于特异性底物型荧光探针用于检测丁酰胆碱酯酶(EC号:3.1.1.8)活性的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的上述缺陷，提供了一种高选择性、高灵敏度、性质稳定、操作简便、易于储运且成本低廉的非肽底物型丁酰胆碱酯酶检测荧光探针及其制备方法和应用。

为达到上述目的，第一方面，本发明提供了一种近红外半菁类荧光探针，其特征在于，所述近红外半菁类荧光探针具有式(1)所示的结构：

第二方面，本发明提供了上述近红外半菁类荧光探针的制备方法，该方法包括在亲核反应条件和缚酸剂存在下，在有机溶剂中，将式(2)所示结构化合物与环丙基甲酰氯接触；

第三方面，本发明提供上述近红外半菁类荧光探针在检测丁酰胆碱酯酶的活性中的应用。

第四方面，本发明提供了一种丁酰胆碱酯酶的活性的检测方法，其中，该方法包括：

将待测样品与如上所述的近红外半菁类荧光探针接触，使得待测样品中的丁酰胆碱酯酶被所述红外半菁类荧光探针中的环丙甲酰基所识别，得到接触后的物料HCY；