[发明专利]一种联产丙酮酸和α-酮戊二酸的重组光滑球拟酵母有效
| 申请号： | 201611112770.0 | 申请日： | 2016-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN106635852B | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 周景文;陈坚;罗正山;堵国成;刘松;方芳 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12P7/40;C12P7/50;C12R1/645 |
| 代理公司： | 23211 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 | 代理人： | 彭素琴<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 酮戊二酸 丙酮酸 总酸 发酵工程技术 光滑球拟酵母 基因工程技术 重组表达质粒 表达载体 工程菌株 酿酒酵母 受体菌 重组菌 电转 构建 联产 整合 酵母 改造 生产 | ||
1.一种联产丙酮酸和α-酮戊二酸的重组菌，其特征在于，所述重组菌是以光滑球拟酵母为宿主，以pY26-TEF-GPD为载体，过表达丙酮酸激酶CDC19基因；所述CDC19基因是NCBI上Gene ID为851193的CDC19基因。
2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌是以缺失了URA3基因的光滑球拟酵母(T.glabrata)CCTCC NO.M202019为宿主，表达NCBI上Gene ID:851193的CDC19。
3.权利要求2所述的重组菌的构建方法，其特征在于，是以缺失了URA3基因的光滑球拟酵母(T.glabrata)CCTCC NO.M202019为宿主，以pY26-TEF-GPD为载体，表达NCBI上Gene ID为851193的CDC19基因。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述重组菌按如下方法构建：
(1)将目的片段CDC19经过限制性内切酶Not I和Pac I双酶切消化后，定向克隆到表达质粒pY26-TEF-GPD中，得到重组酵母表达质粒pY26-CDC19；
(2)将重组质粒pY26-CDC19电转化至受体菌T.glabrata CCTCC NO.M202019，在不含尿嘧啶的培养基中进行筛选，得到重组菌。
5.一种联产丙酮酸和α-酮戊二酸的方法，其特征在于，是将权利要求1-2任一项所述的重组菌应用于丙酮酸和α-酮戊二酸的生产。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将权利要求1-2任一项所述的重组菌接种至发酵培养基，在30℃，200～220rpm条件下进行发酵培养。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基每L中含有：葡萄糖50-120g，尿素≤5g，MgSO4.7H2O≤1g，KH2PO4≤5g，CH3COONa≤5g，微量元素液10mL，维生素液10mL，初始pH＝5.5；所述微量元素液每L含有MnCl2·4H2O≤12g，FeSO4·7H2O≤2g，CaCl2·2H2O≤2g，CuSO4·5H2O≤0.1g，ZnCl2≤1g；所述维生素液每L含有：生物素≤0.01g，硫胺素≤2mg，吡哆醇≤0.2g，烟酸≤2g。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述接种的接种量按体积比为5-10％。
9.权利要求5-8任一项所述的方法在日化、食品、医药、农业领域生产含丙酮酸和/或α-酮戊二酸的产品中的应用。
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