[发明专利]检测替米考星的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种检测替米考星的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、替米考星特异性抗体、酶标记物、替米考星标准溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、样本稀释液。本发明还公开了一种应用上述酶联免疫试剂盒检测替米考星的方法，主要包括：先进行样本前处理，再用试剂盒进行检测，最后分析检测结果。本发明的检测试剂盒可应用于动物组织、蜂蜜、鸡蛋和牛奶样本中替米考星的残留量的检测，其操作简便、快速、准确、灵敏度高、费用低廉等，适合大量样本的筛查和现场监控。

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测替米考星的酶联免疫试剂盒及其应用。

背景技术

替米考星(Tilmicosin)属大环内酯类抗生素，其主要作用机理是干扰菌体蛋白质的合成，主要用于防治家畜肺炎(由胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌、支原体等感染引起)、禽支原体病及泌乳动物的乳腺炎，低剂量时亦可作猪的饲料添加剂以促进增重和提高饲料转换率。虽然该药物具有良好的药理作用，但在体内蓄积达到一定浓度，可引起过敏反应、耳蜗神经损害、听力减退，严重者造成肝肾的严重损害，同时导致携带耐药因子的菌株扩散。

农业部第235号文件中规定，替米考星在肌肉、脂肪中的最高残留限量为75～100μg/kg；在肝脏、肾脏中的最高残留限量为250～1000μg/kg；在奶中的最高残留限量为50μg/L。

目前替米考星的检测方法主要是仪器检测方法和免疫分析检测方法。高效液相色谱法，也是我国测定食品中替米考星的标准方法，但是由于仪器设备昂贵，技术水平要求较高，样品还需要进行纯化处理，不利于现场筛查。文献报道替米考星残留检测的免疫学方法相对较少，且主要集中在奶制品的检测。本发明应用酶联免疫法，测定动物组织、蜂蜜、鸡蛋、牛奶和水质中替米考星药物的残留量，具有检测限低、特异性强、操作简便、检测速度快、检测成本低，非常容易推广等优点。

发明内容

本发明的目的是提供一种替米考星酶联免疫试剂盒及其应用。

一种替米考星酶联免疫检测试剂盒，其包括包被有包被原的酶标板、替米考星特异性抗体、酶标记物、替米考星标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、样本稀释液，所述包被原为替米考星药物抗原，所述酶标记物为酶标记抗抗体。

本发明所提供的替米考星酶联免疫试剂盒，所述替米考星药物抗原为替米考星半抗原与载体蛋白的偶联物，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、鼠血清蛋白、兔血清蛋白、甲状腺蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或人血清白蛋白。

所述替米考星特异性抗体为替米考星单克隆抗体，是用替米考星免疫原免疫动物得到的。所述替米考星单克隆抗体可为鼠源、马源、羊源、兔源或豚鼠源抗体，所述替米考星单克隆抗体优选为替米考星鼠单克隆抗体。

所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶，酶标记抗抗体是采用过碘酸钠法将标记酶与羊抗鼠抗抗体偶联得到。

为了更方便的进行大量样本筛查和现场监控，所述试剂盒还包括：替米考星标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、样本稀释液。

所述标准品溶液为系列替米考星标准品溶液，1mL/瓶，浓度分别为0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、13.5μg/L、40.5μg/L。所述底物液A液为过氧化脲溶液，底物液B液为四甲基联苯胺溶液，所述的终止液为1～2mol/L的硫酸溶液，所述浓缩洗涤液为含1％吐温-20的0.15～0.2mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液，所述的样本稀释液为pH为7.4的0.02mol/L的磷酸盐缓冲液中吐温-20的含量为0.5％混合溶液配制而成的稀释液进行稀释。

其中所述酶标板在制备过程中所用到的包被缓冲液为pH 9.6的0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，封闭缓冲液为10％的小牛血清溶液。