[发明专利]修饰肽的展示

权利要求书

1.建立展示肽的可复制基因包库的方法，所述肽在氨基酸侧链内具有至少一个分子内环键，所述方法包括

a)提供编码肽变体的核酸序列集；

b)将所述核酸序列集连接到可复制基因包的基因内；

c)在所述可复制基因包表面上展示对应的初级肽序列，得到初级库；及

d)采用PTM酶对所述初级库进行酶促加工，得到展示所述肽变体环状结构的成熟库。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述可复制基因包选自由噬菌体颗粒、细菌、酵母、真菌、微生物孢子和核糖体组成的组。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述噬菌体颗粒选自由M13噬菌体、T4噬菌体、T7噬菌体、fd噬菌体和λ噬菌体组成的组。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述环状结构包括至少一个连接所述肽的氨基酸侧链的两个原子的分子内环键。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述原子选自由C、N、O和S组成的组。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述环键为C-N、C-O、C-S、N-N、N-O、N-S、O-O或O-S键。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中使用适当的PTM酶，所述PTM酶能够通过在肽的氨基酸侧链的两个原子之间引入分子内共价键来翻译加工肽，其中所述原子选自由C、N、O和S组成的组。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述PTM酶能够加工天然核糖体肽。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述天然核糖体肽包括Microviridins、乳链球菌素、硫肽(thiopeptides)、芋螺肽、小菌素、溶细胞素、羊毛硫抗生素、蓝细菌素(cyanobactins)、鹅膏毒素、毒伞七肽类(phallotoxins)、环肽和细菌素中的任意种。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述PTM酶选自由羧酸酯-胺连接酶、环化酶、脱氢酶、脱羧酶、差向异构酶、羟化酶、肽酶、脱水酶、转移酶、酯酶、氧合酶和异构酶组成的组。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法得到可复制基因包库，其中所述可复制基因包展示各种肽序列。

12.翻译后修饰展示各种肽的可复制基因包的初级库的方法，通过采用PTM酶进行酶促加工，得到展示各种含有分子内环状结构的肽的可复制基因包的成熟库。

13.根据权利要求12所述的方法，其中使用适当的PTM酶，所述PTM酶能够通过在肽的氨基酸侧链的两个原子之间引入分子内共价键来翻译加工肽，其中所述原子选自由C、N、O和S组成的组。

14.根据权利要求12或13所述的方法，其中所述PTM酶能够加工天然核糖体肽。

15.根据权利要求14所述的方法，所述天然核糖体肽包括Microviridins、乳链球菌素、硫肽(thiopeptides)、芋螺肽、小菌素、溶细胞素、羊毛硫抗生素、蓝细菌素(cyanobactins)、鹅膏毒素、毒伞七肽类(phallotoxins)、环肽和细菌素中的任意种。

16.根据权利要求12-15中任一项所述的方法，其中所述PTM酶选自由以下酶组成的组：羧酸酯-胺连接酶、环化酶、脱氢酶、环化脱水酶、脱羧酶、差向异构酶、羟化酶、肽酶、脱水酶、转移酶、酯酶、氧合酶、异构酶，尤其是羊毛硫氨酸键形成酶、溶细胞素形成酶、蓝细菌素(cyanobactin)形成酶、硫肽形成酶、芋螺肽形成酶、Microviridin(microviridin)形成酶、环肽形成酶、细菌素形成酶和枯草菌素(subtilosin)形成酶。