[发明专利]一种血清4型禽腺病毒灭活苗及其制备方法在审
| 申请号： | 201611102065.2 | 申请日： | 2016-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN106692964A | 公开（公告）日： | 2017-05-24 |
| 发明（设计）人： | 叶建强;张建军;李文迹;张伟;秦爱建;殷健;高巍;邵红霞;梁广成 | 申请（专利权）人： | 扬州大学;国药集团扬州威克生物工程有限公司;福建圣维生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A61K39/235 | 分类号： | A61K39/235;A61P31/14;C12N7/00 |
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| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 血清 型禽腺 病毒 灭活苗 及其 制备 方法 | ||
1.一种血清4型禽腺病毒灭活苗，其特征在于，所述的灭活苗的抗原为通过悬浮培养方法获得的效价不低于109TCID50/ml的灭活后的血清4型禽腺病毒。
2.根据权利要求1所述的血清4型禽腺病毒灭活苗，其特征在于，所述的血清4型禽腺病毒是血清4型禽腺病毒JH株。
3.根据权利要求1所述的血清4型禽腺病毒灭活苗，其特征在于，所述的灭活苗的抗原通过下述方法获得：将血清4型禽腺病毒接种于鸡肝细胞，利用激流式生物反应器扩增血清4型禽腺病毒；反应器转速为40r/min、200g载体初始细胞接种为1×109个、细胞生长液为10％FBS血清的DMEM/F12培养液、病毒感染及维持液为含2％FBS血清的DMEM/F12培养基、最适PH为7.0-7.2、病毒接种量MOI为0.1以及病毒收获时间为接种后96小时。
4.一种制备高效价血清4型禽腺病毒灭活苗的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)血清4型禽腺病毒悬浮培养：将血清4型禽腺病毒接种于鸡肝细胞，利用激流式生物反应器扩增血清4型禽腺病毒；悬浮培养激流式生物反应器主要培养条件参数为：反应器转速为40r/min、200g载体初始细胞接种为1×109个、细胞培养液为10％FBS血清的DMEM/F12培养液、病毒感染及维持液为含2％FBS血清的DMEM/F12培养基、最适PH为7.0-7.2、病毒接种量MOI为0.1以及病毒收获时间为接种后96小时；感染后96小时后收集病毒、分装，并测定病毒效价；
(2)血清4型禽腺病毒灭活苗制备：将以上扩增获得的血清4型禽腺病毒按终浓度0.1％的比例加入甲醛溶液，置37℃灭活24小时，并进行灭活及无菌检验；将灭活血清4型禽腺病毒稀释至4×107.0TCID50/mL，按V/V为4％的比例，向灭活病毒液中加入灭菌吐温-80，并使吐温-80彻底溶解，获得水相；将3份油相导入乳化罐中，同时缓慢加入1份水相进行乳化，制成血清4型禽腺病毒灭活疫苗，分装。
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