[发明专利]用于快速检测ABCB1基因C3435T多态性的核酸、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了用于快速检测ABCB1基因C3435T多态性的核酸、试剂盒及方法，该核酸包括检测引物和检测探针，其中，所述检测引物包括野生型下游引物、突变型下游引物和公用上游引物，所述野生型下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1，所述突变型下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述公用上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述检测探针的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。本发明提供的实时荧光定量PCR快速检测ABCB1基因C3435T多态性的检测试剂盒和方法，使用方便，操作简便，自动化程度高，大大简化了操作过程，并减少了在操作过程的污染，检测效果好，具有高灵敏度、高特异性、高准确度、高精确度的特点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用荧光定量PCR技术快速检测ABCB1基因C3435T多态性的核酸、试剂盒及方法。

背景技术

冠状动脉性心脏病是我国常见的心血管疾病之一。经皮冠状动脉内支架介入治疗(PCI)作为心肌血流重建术中创伤最小的一种方法，能使冠心病人群的长期预后得到较大改善，目前已成为治疗冠心病的重要手段。然而PCI术后易在支架植入处形成血栓，造成不同程度的阻塞，从而导致不稳定心绞痛、急性心肌梗死、甚至猝死等一系列急性并发症。即使未植入支架的冠状动脉在其他病变部位也经常会因粥样硬化的进展引发血栓不良事件。

为预防血栓的形成，在急性冠状综合征(ACS)和PCI术后的病人中目前普遍采用氯吡格雷和阿司匹林双联用的标准抗血小板治疗，以降低心血管事件(死亡、中风、再发心梗)的发生率。然而由于个体对药物的反应存在差异，仍有一部分患者在服用了标准剂量的氯吡格雷之后，仍然发生血栓栓塞等不良的心血管事件，即氯吡格雷抵抗(CR)。

CR的发生是多种因素共同作用的结果，包括遗传变异、与其他药物的相互作用、药物剂量、个体依从性、血小板更新速度、旁路代谢等。氯吡格雷是一种前体药物，必需经过肠内吸收、肝脏代谢才能转变成有活性的药物成分，从而发挥其抗血小板聚集的作用。ABCB1基因编码肠道上皮细胞产生的P糖蛋白(P-gp)，P-gp可以直接影响氯吡格雷从消化道进入血液，不同个体间P-gp的差异可能会引起氯吡格雷在不同个体间治疗效果的差异。

ABCB1基因在人类7号染色体上，包含28个外显子，编码一个长度为170KDa的跨膜糖蛋白P-gp。ABCB1基因的C3435T多态性位点，可通过密码子的改变而影响蛋白质的折叠结构，使其对调节分子或底物的亲和力发生变化，从而对药物的代谢产生影响。对氯吡格雷治疗患者的研究发现，ABCB1基因C3435T多态性位点的T等位基因携带者，与主要不良心血管事件(MACE)的发生风险密切相关。同样地，在Tabasson simon的研究中，氯吡格雷的血清浓度和有活性的代谢产物，在该位点的TT基因携带人群中减少。因此通过对ABCB1基因C3435T多态性位点的检测，将更好地为心血管病人提供个体化的抗血小板治疗方案，对预防不良心血管事件具有积极意义。

可用于ABCB1基因多态性检测的技术方法主要有测序法、液相芯片法、溶解曲线法等。DNA测序法虽然是基因分型的金标准，但检测灵敏度低、样品易污染，出现假阳性，实验操作复杂，费时、检测效率低。而熔解曲线法虽然快速简便，但假阳性率高。液相芯片法操作过程复杂，且容易污染，假阳性率高。

发明内容

为克服现有技术检测能力的不足，本发明的目的是提供一组用于快速检测ABCB1基因C3435T多态性的核酸。本发明的另一个目的是提供一种用于快速检测ABCB1基因C3435T多态性的试剂盒及其检测方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：