[发明专利]山芝麻酸甲酯在制备治疗化学性肝纤维化药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药山芝麻提取物的用途，具体地说是山芝麻酸甲酯为原料在制备治疗四氯化碳引起的化学性肝纤维化药物中的应用。

背景技术

肝纤维化是多种慢性肝病发展成为肝硬化的必经病理环节，发病率高，严重威胁着广大人民群众的身体健康，然而，临床研究慢性肝病肝纤维化常常受到许多客观条件的限制，所以采用动物模型手段研究肝纤维化已受到普遍重视并广为接受。四氯化碳(CCl₄)是诱导大鼠肝纤维化模型最广泛应用的肝毒性物质，它诱导的肝纤维化动物模型在形态学、病理生理学的某些方面与人肝纤维化相似，是国内外常用的肝纤维化模型。研究表明肝纤维化尚有逆转至正常的可能，因此阻止或逆转肝纤维化进程成为治疗慢性肝病的重要策略。

目前，临床对肝纤维化的治疗仍没有明确的方案和有效治疗药物。近些年来，国内外大量研究表明天然药物和中药在治疗肝纤维化方面显示出了可靠疗效和较少不良反应的特点。因此采用现代化技术从天然药物和中药中开发治疗肝纤维化的新药具有重要意义。

山芝麻作为一种传统草药，为梧桐科山芝麻属植物山芝麻Helictercs angustifolia L.，具有抗病毒，抗脂质氧化及护肝等多方面的作用，其活性成分之一山芝麻酸甲酯(methyl helicterate，MH)对CCl₄诱导的肝损伤、炎症、肝纤维化的作用仍知之不多。

发明内容

本发明的目的是通过对山芝麻酸甲酯治疗化学性肝纤维化进行研究，开发山芝麻酸甲酯为原料在制备治疗四氯化碳引起的化学性肝纤维化药物的新用途。

本发明是基于发明人的实验研究而完成的。研究分两大部分：

一、山芝麻酸甲酯的制备

提取方法：10kg山芝麻药材粉碎后，用80L 80％乙醇回流提取3次，合并3次乙醇提取液，真空回收乙醇，得到乙醇提取物；然后乙醇提取物加蒸馏水重悬，依次用乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，乙酸乙酯层萃取物溶解在热水中，过滤，浓缩后得到黄色粉末粗产物，接着上硅胶柱进一步分离，采用氯仿和甲醇混合物进行梯度洗脱，用薄层色谱收集相同组份，其中，第2组分上ODS柱和高效液相色谱进一步纯化，最后得到白色晶体山芝麻酸甲酯。

二、山芝麻酸甲酯治疗CCl₄诱导肝纤维药效学实验

将SD雄性大鼠以CCl₄诱导大鼠肝纤维化模型，观察山芝麻酸甲酯治疗化学性肝纤维化的作用。结果表明山芝麻酸甲酯能明显降低血清谷丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)的水平；肝组织前列腺素E2(PGE2)的含量；血浆白细胞介素-6(IL-6)，人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，髓过氧化物酶(MPO)的水平；降低肝组织及血清丙二醛(MDA)的水平，显著提高肝组织超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(catalase)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)，谷胱甘肽还原酶(GSH-Rd)的活性，提示满天星异荭草苷具有抗脂质过氧化反应的作用。

H&E染色病理检查结果显示，正常组大鼠肝小叶结构清晰且完整，以中央静脉为中心，向四周呈放射状排列，肝细胞未见变性或坏死。模型组大鼠肝细胞出现肿胀、气球样变，肝小叶被破坏，或肝局灶性坏死以及淋巴细胞浸润的现象。山芝麻酸甲酯组大鼠可观察到肝组织病理损伤比模型组明显减轻。

酶联免疫吸附(ELISA)法和比色法分别测定NF-κB p65和细胞色素P4502E1(CYP2E1)的活性，结果表明，与模型组比较，山芝麻酸甲酯可明显抑制NF-κB p65，CYP2E1的活性。

免疫组化法测定Fas，FasL和CYP2E1的表达，结果表明，与模型组比较，山芝麻酸甲酯可明显抑制Fas，FasL和CYP2E1的表达。

Western blot法测定大鼠肝组织诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、环氧酶(COX-2)、胱天蛋白酶3(caspase-3)，胱天蛋白酶8(caspase-8)的表达，结果表明，与模型组比较，山芝麻酸甲酯可明显抑制iNOS、COX-2、caspase-3和caspase-8蛋白的表达。

本发明开发了山芝麻酸甲酯在制备治疗四氯化碳引起的化学性肝纤维化药物中的应用。

所述的山芝麻酸甲酯是应用于治疗四氯化碳引起的化学性慢性肝损伤。

所述的山芝麻酸甲酯是应用于治疗四氯化碳引起的肝脏炎症。

所述的山芝麻酸甲酯是应用于治疗四氯化碳引起的化学性肝纤维化。