[发明专利]特异性顺式作用元件及含该顺式作用元件的启动子和核酸构建体及其应用

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及几丁质特异诱导表达启动子Ptchi2的序列、顺式作用元件的序列“ACTTGTTCA”及其应用。从棘孢木霉TD3104(CGMCC No.13161)中克隆得到内切几丁质酶基因Tachi2的启动子Ptchi2，其核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，该启动子包括启动子核心序列和响应几丁质诱导的顺式作用元件；具有被几丁质特异诱导、不受葡萄糖抑制的特性。本发明利用启动子Ptchi2构建不同的重组载体或重组菌或表达盒，分析了Ptchi2的启动子活性，利用缺失突变研究了启动子核心序列和响应几丁质诱导的顺式作用元件，为其在真菌和植物基因的表达调控、植物抗病、虫基因工程中的应用提供理论依据。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及几丁质特异诱导表达启动子Ptchi2和特异性顺式作用元件及其应用。

背景技术

基因表达调控是基因工程研究的中心内容之一，转录水平的调控发生在基因表达的初期，是基因表达调控的主要方式，启动子则是基因转录水平表达调控的重要和关键元件，在基因的调控方面起着决定性作用。诱导型启动子灵活的表达调控方式赋予了生物更强的适应环境变化能力和广阔的开发利用前景。利用诱导型启动子代替组成型启动子，已成为实现基因表达调控的一个重要策略，并应用于酵母的外源基因表达调控、植物抗逆和抗病虫基因工程领域。如典型的巴斯德毕赤酵母表达系统，利用的是醇氧化酶-1(AOX1)基因的启动子，诱导物为甲醇，目前已广泛应用于异源蛋白的表达调控，但是甲醇有毒易燃，应用受到一定的限制；hsr203J为来源于烟草的病原诱导型启动子，转基因烟草中由hsr203J驱动的popA基因提供了对卵菌病原体的高度抗性，拟南芥逆境胁迫诱导表达基因rd29A启动子在转基因小麦中可以调控小麦的耐旱、耐寒性等等。除了直接利用全长启动子驱动基因的表达外，利用已知的诱导顺式调控元件组合进行基因表达调控已成为一个重要策略，具有良好的应用前景。

一个理想的诱导表达启动子应具有高效诱导性、特异性和诱导物的安全性，但是目前比较理想、能应用于实际生产的诱导型启动子还很少。几丁质作为几丁质诱导启动子的诱导物，不仅安全、经济，而且也是主要植物病原真菌细胞壁的重要成分，在基因表达调控和诱导植物抗病性方面发挥重要作用，具有重要的研究应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供了启动子Ptchi2的全序列、核心序列、响应几丁质诱导的顺式作用元件及其应用，启动子Ptchi2为内切几丁质酶基因Tachi2的启动子，是从棘孢木霉TD3104(保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号：CGMCC No.13161)中克隆得到的，该启动子为诱导型启动子，具有被几丁质特异诱导、不受葡萄糖抑制的独特诱导启动特性。

本发明的技术方案为：

一种启动子，所述启动子含有选自以下任一组并具有启动子功能的核苷酸序列；

a、SEQ ID No:1所示的核苷酸序列；

b、与SEQ ID No:1互补的核苷酸序列；

c、在高等严紧条件下能够与上述a或b的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；

d、对上述a或b所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰的核苷酸序列；

e、与上述a或b所示核苷酸序列具有至少90％同一性的核苷酸序列。