[发明专利]一种肾阳虚证动物模型生物标志物的筛选及确定方法

权利要求书

1.一种肾阳虚证动物模型生物标志物的筛选及确定方法，其特征在于，所需具体步骤如下：

（1）肾阳虚证大鼠模型的建立；

（2）差异蛋白的筛选；

（3）对部分与肾阳虚证相关差异蛋白的验证；

（4）肾阳虚证动物模型生物标志物的确定；

所用于构建动物模型的大鼠为WISTAR大鼠；

所述差异蛋白筛选的具体步骤如下：

大鼠松质骨总蛋白的提取；

测定蛋白浓度；

双向凝胶电泳分析；

凝胶蛋白点的检测与差异蛋白点显示分析；

差异蛋白的MALDI-TOF-MS质谱分析；

蛋白质数据库检索及鉴定，确定差异蛋白；

所述部分与肾阳虚证相关差异蛋白的验证方法如下：

应用Western-Blot方法从蛋白质水平对标志物进行验证；

应用RT-PCR方法从基因水平对标志物进行验证；

RT-PCR中采用的基因引物为：

Col1a1-F：ATCCTGCCGATGTCGCTATCCA，Col1a1-R：AGCCATCCACAAGCGTGCTGTA；

Arhgdia-F：CATTGTGACCCGCTTGACCT，Arhgdia-R：TCTGTGAAGCGGGACTTGATGT；

GAPDH-F：ACGGCAAGTTCAACGGCACAG，GAPDH-R：GAAGACGCCAGTAGACTCCACGAC；

所述肾阳虚证动物模型生物标志物的确定方法为：将血清蛋白的ELISA检测结果与Western-Blot、RT-PCR检测结果对比分析，选取表达趋势一致且在正常值范围之外的差异蛋白作为生物标志物；

最终确定的用作肾阳虚证的血清生物标志物为Ⅰ型胶原α-1链及GDP解离抑制因子1，且与正常组比较，肾阳虚证大鼠Ⅰ型胶原α-1链及GDP解离抑制因子1表达下降。