[发明专利]分析甲萘威残留的ELISA检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.抗甲萘威纳米抗体，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.分析甲萘威残留的ELISA检测试剂盒，包括盒体、设在盒体内可拆卸的酶标板以及设在盒体内的试剂，其特征在于，所述酶标板的每个孔包被有甲萘威包被抗原，所述试剂包括权利要求1所述纳米抗体、甲萘威标准溶液、酶标记的二抗、缓冲液PBS、洗涤液PBST、显色液和反应终止液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述甲萘威包被抗原为半抗原N-(1-萘氧羰基)-6-氨基己酸与牛血清蛋白的偶联复合物，所述包被抗原的制备方法如下：

(1)将30.2mg N-(1-萘氧羰基)-6-氨基己酸、13.9mg N-羟基琥珀酰亚胺和24.3mg N,N'-二环己基碳二亚胺，溶于1mL无水二甲基甲酰胺中，室温下搅拌过夜反应；将反应液离心，弃沉淀，收集上清液；

(2)将牛血清蛋白20mg溶于0.05M，pH 9.6的碳酸盐缓冲液2mL中，搅拌下逐滴加入所述上清液，加完后室温下继续搅拌反应4h；

(3)反应结束后，将反应液装入透析袋内用PBS液透析；每6h换液一次，共换液5-6次；透析后离心，弃沉淀，收上清液，作为抗原包被液。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标板为96孔酶标板，包被抗原的包被浓度为100ng/mL。

5.根据权利要求2-4任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述纳米抗体的浓度为0.535ng/mL。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标记的二抗为辣根过氧化物酶标记的抗HA标签抗体，浓度为0.1μg/mL。

7.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述显色液包括A液和B液，A液由过氧化脲1g、柠檬酸10.3g、Na₂HPO₄·12H₂O 35.8g、吐温-20 100μL和蒸馏水1000mL配制而成，pH值5；B液由四甲基联苯胺700mg、DMSO 40mL、柠檬酸10.3g和蒸馏水1000mL配制而成，pH值2.4。

8.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述反应终止液为2M的硫酸液。

9.权利要求2-8任一项所述试剂盒在ELISA法检测样品中甲萘威残留的应用。

10.甲萘威ELISA检测试剂，其有效成分为权利要求1所述抗体。