[发明专利]microRNA标志物组及其在制备检测胃癌淋巴结转移试剂盒中的应用

说明书

本发明涉及microRNA标志物组及其在制备检测胃癌淋巴结转移试剂盒中的应用。microRNA标志物组，由miR‑27b‑5p，miR‑128‑3p，miR‑100‑5p和miR‑214‑3p组成，miR‑27b‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，miR‑128‑3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，miR‑100‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，miR‑214‑3p的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。本发明首次构建了检测胃癌淋巴结转移的包含4个microRNA标志物的microRNA标志物组，对胃癌淋巴结转移的预测有极高的准确性和特异性。

技术领域

本发明涉及microRNA标志物组及其在制备检测胃癌淋巴结转移试剂盒中的应用，属于医学分子生物学技术领域。

背景知识

胃癌是我国最常见的肿瘤之一，在我国发病率居各类消化道肿瘤的首位。胃癌高死亡率最主要的原因是患者诊断明确时已经处于胃癌晚期，胃癌患者的存活率非常低，大约5％-15％。虽然胃癌的诊断和治疗有所改善，但是胃癌患者的预后非常差，尤其是有远处转移的患者。早期胃癌指癌组织仅局限于粘膜层和粘膜下层，判断早期胃癌的标准不是其面积的大小和是否有局部淋巴结转移，而是其浸润的深度。内镜粘膜下剥离术是近年来出现的一项新的治疗手段，也是临床应用前景很好的技术，广泛应用于早期胃癌的治疗。内镜粘膜下剥离术是在内镜下，使用高频电刀与专用器械，将胃部早期肿瘤与其下方正常的粘膜下层逐步剥离，以达到将病灶完整切除的目的。内镜粘膜下剥离术允许早期胃癌病变超过2厘米及破溃的病变，并且可对切除癌组织进行准确的组织学分级的评估。另外，由于内镜粘膜下剥离术创伤小的优点，对年老者及高手术风险的患者非常有利。但是，在早期胃癌患者进行内镜粘膜下剥离术后，患者可能会发生淋巴结转移从而导致胃癌复发及转移，影响胃癌患者预后。目前为止，内镜粘膜下剥离术的胃癌患者是否伴随着淋巴结转移的发生是不清楚的。但是，淋巴结转移是胃癌患者不良预后的主要原因，并且淋巴结转移是重要单一的预后不良因子。因此，合适的分子标志物可为预测胃癌患者淋巴结转移提供重要的线索和依据，促进胃癌患者个体化治疗目标的实现。

miRNAs是近几年研究的热点，它是真核生物中发现的一类短链内源性非编码RNA，长约22个碱基左右，主要通过与靶基因3’UTR完全或不完全配对，降解靶基因mRNA或抑制其翻译，从而参与调控个体发育、细胞凋亡、增殖及分化等生理及病理过程。越来越多的研究表明miRNAs在肿瘤转移，发展和进展过程中发挥着重要作用。Khan等人认为miR-27b-5p与神经母细胞瘤的转移相关。许多研究显示miR-101-5p在多种肿瘤中能抑制促转移基因，例如EZH2，VEGF-C和HMGA2等基因。同样地，miR-128-3p能调控上皮间质化并且抑制癌细胞的迁移和浸润能力。miR-100-5p在多种肿瘤中通过抑制多个靶基因被认为是抗转移的调控者。除了以上提到的miRNAs，miR-145-5p在肺癌中表达降低，并且与淋巴结转移相关。Xing等人报道miR-145-5p可抑制胃癌的浸润和转移。Wang等人研究表明miR-214-3p在胃癌中表达降低，与癌细胞的迁移，浸润及胃癌的淋巴结状态有关。

研究表明miRNAs表达谱能够作为许多肿瘤诊断和预后的标志物。Wei等人发现miRNAs表达谱检测为肝癌患者的诊断和预后提供了可行的方法。Yu等人也表明miRNAs表达谱可以很好的预测非小细胞肺癌患者的预后。miRNAs表达谱在胃癌中的研究揭示miRNAs的表达与胃癌发生，进展及个性化治疗有密切关系。例如，Li等人检测了7个miRNAs(miR-10b,miR-21,miR-223,miR-338,let-7a,miR-30a-5p,miR-126)表达谱与胃癌患者总体生存和无瘤生存时间密切相关，并且这种预后相关的miRNAs表达谱可应用于胃癌患者个体化治疗。Liu等人发现5个miRNAs表达谱(miR-1,miR-20a,miR-27a,miR-34and miR-423-5p)可作为胃癌检测的新的诊断指标，并且基于5个miRNAs的生物标记可预测在肿瘤进展分期。