[发明专利]一种基于graphene/Fe3O4@Au/CeO2/TiO2的电致化学发光传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于graphene/Fe₃O₄@Au/CeO₂/TiO₂电致化学发光传感器的制备方法及应用。具体涉及一种CeO₂/TiO₂作为发光材料，利用纳米多孔材料graphene/Fe₃O₄@Au优良的生物兼容性和大的比表面积作为基底材料增加抗体的固载量。以graphene/Fe₃O₄@Au/CeO₂/TiO₂作为基底材料，属于电化学发光检测技术领域。

背景技术

肺癌标志物在肺癌的临床诊断和早期治疗中的作用不容忽视。正常情况下，肺癌标志物在健康人的体液中浓度特别低，只有机体发生肿瘤时，肺癌标志物才会呈现出较高的浓度,这往往与肺癌、肝炎、以及膀胱癌等多种疾病相关。血清中肺癌标志物的浓度的快速、灵敏地检测对于癌症的早发现、早治疗有着重大意义。

目前检测肺癌标志物的分析方法主要有放射免疫分析法、酶联免疫分析法和试剂盒法，但是所用的试剂有效期短，具有放射性污染，检测周期长，灵敏度低，步骤繁琐等缺点。为了克服以上传统分析方法的缺点，本发明设计了一种特异性强，灵敏度高，无放射性污染，操作快速简便的电致化学发光免疫分析方法。

发明内容

本发明的目的是针对现有的肺癌标志物检测方法存在的问题，提供一种快速可靠的基于graphene/Fe₃O₄@Au和CeO₂/TiO₂的电化学发光传感器的制备方法，实现对肺癌标志物的快速、灵敏、特异、高效检测。

本发明的技术方案如下：

1. 一种基于graphene/Fe₃O₄@Au/CeO₂/TiO₂的电致化学发光传感器的制备方法，包括以下步骤：

（1）分别用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化铝抛光粉对直径4 mm的玻碳电极做抛光处理，用超纯水冲洗干净；

（2）滴加6 μL、2 ~ 4 mg/mL的抗体Ab捕获基底材料graphene/Fe₃O₄@Au /CeO₂/TiO₂/Ab溶液于电极表面，4 °C晾干；

（3）滴加3 μL、质量分数为1 ~ 3%的牛血清白蛋白溶液，以封闭电极表面的非特异性活性位点，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液溶液冲洗电极表面，4 °C晾干；

（4）滴加6 μL、一定浓度的待测物抗原，4 °C下孵化0.5 ~ 2 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液溶液冲洗电极表面，4 °C晾干后，制得一种基于graphene/Fe₃O₄@Au /CeO₂/TiO₂的电致化学发光传感器。

2. 抗体捕获基底材料graphene/Fe₃O₄@Au/CeO₂/TiO₂/Ab溶液的制备

（1）将0.1 ~ 2 mL、浓度为12 mol/L盐酸溶液加入到5 ~ 30 mL的超纯水中，随后向溶液中加入0.5 ~ 6.0 g三氯化铁固体和0.5 ~ 6.0 g氯化亚铁固体，在持续搅拌下，将混合溶液逐滴加入到100 ~ 500 mL、浓度为0.5 ~ 5.0 mol/L的氢氧化钠溶液中，在4000 ~ 8000 rpm的转速下进行离心分离，用超纯水洗涤三次，之后向沉淀中加入200 ~ 600 mL、浓度为0.01 ~ 0.04 mol/L的盐酸溶液，在6000 ~ 9000 rpm的转速下离心分离5 ~ 15min，弃去上清液，加入超纯水进行超声得到黄色的Fe₃O₄纳米溶胶；