[发明专利]抑制军团菌微生物源抗菌肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物活性物开发利用领域，具体涉及一类新型生物活性多肽及其制备方法。

背景技术

1976年在美国费城退伍军人大会爆发了急性发热性呼吸道疾病造成221人感染，其中34人死亡，经研究首次确认由军团菌(Legionella spp.)的感染导致军团病。随着城市规模的发展，人口越来越密集，使得军团病在全球频繁爆发。2016年3月受污染的空调组件造成澳悉尼市政厅车站附近爆发军团菌感染。2015年7月美国纽约布朗克斯区南部集中爆发，确诊113例感染者，死亡12人。2015年杭州市疾病预防控制中心的调查表明，杭州市公共场所集中空调系统军团菌污染较严重检出率高达33％，分布较广。

军团菌是一类水生菌群,可在非常恶劣的生存环境下生存，尤其在与现代生活息息相关的人工环境中存活，如空调机的冷却塔、喷水池、淋浴、汽车水箱与自动玻璃清洗器、游泳池等。研究表明军团菌一般寄生在原生动物中，通常以气溶胶的形式被吸入，并在人肺泡巨噬细胞和肺上皮细胞中复制，导致呼吸道感染，引起严重的非典型肺炎，其病死率可高达22.8％。与人们已经熟识的非典SARS不同，虽然其检出率很高，但人们对其缺乏了解，不能及时的进行防护或医治，容易造成极大危害，故军团病又被称为“另类非典”。军团菌感染已严重威胁公共卫生安全，成为急待解决的医学难题。

目前军团菌的杀菌方法主要包括物理的(如紫外线、加热等)和化学的(氯化等)方法。在控制军团菌方面，化学方法应用的较为广泛，但考虑它们可能对人体安全、设备和环境等产生不利影响，使得化学方法受到局限。在军团菌病的治疗方面，目前使用通常使用红霉素作为治疗药物。但红霉素对胃酸不稳定，口服吸收不完全，血药浓度低，组织浓度也不能达到治疗的满意效果，且有较多的胃肠反应。上述的军团菌控制和治疗方面的措施还不能阻止军团菌感染问题，寻找与红霉素抗菌作用类似，临床药理等特性优于红霉素，又能提高血药及组织浓度的新的药物是治疗军团菌感染及其他感染疾病急需解决的重大科学问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种来源于芽孢杆菌HZ16(CGMCC No.12406)的新型生物活性多肽的制备方法。

为了实现上述目的及其他相关目的,本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面,提供了一类分离的生物活性多肽,其包括：

a)由Acyl-Glu-Val-Leu-Leu-Asp-Leu-Leu-OH所示的氨基酸组成，Acyl-部分是C10～C16的一系列不同链长的直链或带有支链的脂肪酸。如下式(I)所示

Acyl是C10～C16直链或带有支链的脂肪酸；

或式中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且有同等活性的衍生多肽。

b)或序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且有同等活性的由(a)衍生的多肽。

c)该类抗菌肽包括全L-型和全D-型对映异构体或者所述的抗菌肽任意一个或几个氨基酸用L-型和D-型氨基酸取代。

d)所述的生物活性肽或所述多肽的衍生物为环缩酚肽以及Pumilacidin类物质的分子量在999～1080之间，分别为1035分子式C₅₃H₉₃N₇O₁₃、1049分子式C₅₄H₉₅N₇O₁₃、1063分子式C₅₅H₉₇N₇O₁₃、和1077分子式C₅₆H₉₉N₇O₁₃。

较优的，所述生物活性肽的来源为芽孢杆菌的发酵物。

较优的，芽孢杆菌HZ16发酵液中的环缩酚肽以及Pumilacidin类物质具有较强的抑制军团菌活性。

较优的，所述生物活性肽具有抑制微生物的生物活性，特别的对于军团菌有很高的选择 性。

较优的，所述生物活性肽具有

本发明的第二方面,提供了前述生物活性多肽的制备方法,包括如下步骤：

1)发酵：将芽孢杆菌HZ16接种到LB培养基中发酵24h,获得发酵液。

2)干燥：将步骤1)中收集的发酵液利用冷冻干燥法除掉水分。

3)粗提：利用有机溶剂对步骤2)中获得的固体用乙酸乙酯溶剂进行超声波震荡萃取，获得粗提物。