[发明专利]一种外泌体快速分离和纯化的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地涉及一种外泌体快速分离和纯化的试剂盒。

背景技术

外泌体(exosome)是由多种活细胞分泌的囊泡小体，其中含有蛋白质和RNA等多种组分，直径大多介于30～100 nm之间。在电子显微镜下，可见外泌体由双层磷脂分子包裹，形态呈扁形或球形小体，有些为杯状；其在体液中的存在形式以球形结构为主，通常可在蔗糖密度梯度溶液中密度1．13～1.19 g／ml的范围获得富集。目前认为外泌体可由各种类型的细胞分泌，发源于细胞内吞系统中的晚期内体。

外泌体在外周血、尿液、唾液、腹水、羊水等体液中具有很高的丰度，而不同组织来源的外泌体在组成和功能方面存在差异，同时这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。肿瘤来源或肿瘤相关的外泌体是调控肿瘤发生发展的重要机制，对肿瘤外泌体的分析和检测可以辅助肿瘤的早期诊断、疗效评价和预后分析。此外，外泌体及其修饰加工产物还可以作为基因或药物的有效载体，用于肿瘤治疗。

最常用的外泌体纯化手段是超离法，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单，获得的囊泡数量较多而广受欢迎，但过程比较费时(20小时以上)，且回收率不稳定，纯度也受到质疑；此外，重复离心操作还有可能对囊泡造成损害，从而降低其质量。

本专利的外泌体分离纯化试剂盒通过高分子过滤柱的原理而制备，是一款可以快速高效地从血清、血浆、细胞培养上清中提取exosome的试剂盒，该试剂盒具有如下特点：操作简单，无需超速离心，1~2小时内即可完成抽提和纯化；纯度高，富集量大，从2~4ml细胞上清液中可获得200~400ng外泌体蛋白或50-200ng外泌体RNA；成本低，稳定性好，便于运输，便于保存；适用于血清、尿液、唾沫、积水等体液以及细胞培养液进行外泌体的抽提和纯化。

发明内容

一种外泌体快速分离和纯化的试剂盒，包括溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和纯化柱，共四部分组成，每种组成的体系或者数量如下：

规格10rnx40rnx溶液I2.5 ml10 ml溶液II2.5 ml10 ml溶液III10 ml20 ml x 2纯化柱10个40个

溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ按照下文所描述的操作后可以有效的分离外泌体，再通过纯化柱纯化，可以获得高纯度的外泌体颗粒。

本发明试剂盒可用于血液、尿液、唾液、积液等体液以及细胞培养液的外泌体提起和纯化。

本发明试剂盒可用于人源、大鼠、小鼠、兔子等哺乳动物体液的外泌体提起和纯化。