[发明专利]用于鉴别伪狂犬病病毒株的三重荧光定量PCR的引物、探针和试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于鉴别伪狂犬病病毒经典株、变异株和Bartha‑K61疫苗株的三重荧光定量PCR的引物、探针和试剂盒。本发明首先公开了用于鉴别伪狂犬病病毒经典株、变异株和Bartha‑K61疫苗株的三重荧光定量PCR的引物及探针，其中引物序列为SEQ ID No.8‑9、SEQ ID No.14‑15所示，探针序列为SEQ ID No.1、4和6所示。本发明进一步公开一种三重荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒基于三种标记不同荧光信号的TaqMan探针，可以准确鉴别伪狂犬病病毒经典株、变异株和Bartha‑K61疫苗株，具有良好的敏感性和特异性，能够应用于伪狂犬病病毒毒株的区别检测。

技术领域

本发明涉及用于鉴别伪狂犬病病毒经典株、变异株和Bartha-K61疫苗株的三重荧光定量PCR的引物和探针，还涉及一种鉴别伪狂犬病病毒经典株、变异株和Bartha-K61疫苗株的三重荧光定量PCR检测试剂盒，属于伪狂犬病病毒不同毒株的检测鉴别领域。

背景技术

伪狂犬病(Pseudorabies，PR)又称奥耶茨基氏病，是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)感染引起的家畜及野生动物的急性传染病，是引起世界养猪业重大经济损失的病原之一。猪是该病的储存宿主和主要传染源，临床症状以发热、神经系统和呼吸障碍为主要特征。哺乳期仔猪和幼猪对该病毒最为敏感，感染后，体重和食欲下降，死亡率为50-100％。PRV也称作猪疱疹病毒1型，属疱疹病毒科。PRV是双链DNA病毒，长度约为143kb，可编码70-100种蛋白(Mettenleiter TC.2000.Aujeszky’s disease(Pseudorabies)virus:the virus and molecular pathogenesis–state of the art.VetRes 31:99–115.)。

从2011年底开始，中国多个省份的养猪场陆续爆发伪狂犬病新疫情，即使免疫过Bartha-K61弱毒疫苗，仍然无法有效抵御新的疫情。一些研究显示，此次疫情是由PRV变异株引起。同PRV经典株相比，变异株多个基因出现有规律的插入和缺失，如gE、gI和gB基因。这些变异株在进化上形成了一个新的分支(An TQ,et al.,2013.Pseudorabies virusvariant in Bartha-K61-vaccinated pigs,China,2012.Emerg Infect Dis 19:1749–1755；Luo Y,et al.,2014.Pathogenicity and genomic characterization of apseudorabies virus variant isolated from Bartha-K61-vaccinated swinepopulation in China.Vet Microbiol 174:107–115.)。目前，Bartha-K61疫苗株已不能对PRV变异株提供充分的保护，因而PRV变异株对中国养猪业构成严重威胁。