[发明专利]一种法医学硅藻检验方法

说明书

本发明公开了一种法医学硅藻检验方法，包括如下步骤：按比例取磺胺二甲嘧啶、丙烯酸、丙烯酰胺、N’N‑亚甲基双丙烯酰胺、过硫酸铵和去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，置于60℃的烘箱中聚合反应3h制备薄膜状的印迹水凝胶；将所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，超声振荡去除其中的模板分子磺胺二甲嘧啶后，浸泡在待检测样品内5‑10min后取出，置于光学显微镜下观察；采用人工识别方式或计算机自动化识别方式对滤膜上的硅藻或所拍摄的图片进行检查、分类和统计处理。本发明回收率高、效率高、性价比高、易于推广，定性定量分析准确、劳动强度低。

技术领域

本发明涉及及藻类检验领域，具体涉及一种法医学硅藻检验方法。

背景技术

硅藻是一种单细胞藻类，全世界约有16000多种，体长一般在1μm至200μm之间，其最明显的特征是细胞壁除个别种类外，均高度硅质化，形成上、下两个透明的壳，以壳环带套合形成一个硅质细胞壁。硅藻的生活环境非常广泛，自然界中的水域，几乎都能见到硅藻的踪迹。

水中尸体是法医学尸体检验中常见的类型。20世纪40年代以来，许多法医学者在溺死者尸体上证实，硅藻可由循环系统进入多个脏器。硅藻细胞壁因抵抗力强而不易被破坏，硅质含量高者，使用浓硫酸、浓硝酸煮沸甚至高温烧灼也不被破坏。因此，硅藻检验是解决水中尸体的死因问题的一种可靠手段。

法医学实践中，1-30g组织器官消解后通常会留下10-50ml的消解液，离心是富集水样或组织器官消解液中硅藻的常用方法。如GA/T 813-2008标准(《人体组织器官中硅藻硝酸破机法检验》)中，将消化后的消解液倒入离心管经反复离心后制片；最后采用光镜观察法，以10倍或40倍物镜检查硅藻。根据胡孙林等研究报道表明，离心一次导致大约10％的硅藻损失，增加离心速度不能显著提高硅藻的回收率，因此导致脏器组织中硅藻回收率低。

由于真空抽滤的方法也可富集硅藻，但是滤膜本身是不透明的，无法直接置于光学显微镜下观察，因此胡孙林等尝试使用真空抽滤-自动化扫描电镜的方法观察硅藻。虽然电子显微镜的分辨率高、观察清晰，但是，鉴于其操作复杂、成本较高、维护费用高的特点，使得电子显微镜只能在一些大中型实验室和科研机构使用，无法广泛应用于基层法医学实验室。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种法医学硅藻检验方法，检验灵敏度高、检验效率高、又不会显著增加设备成本，还具有环境友好的优点，并可满足现场、高通量检测的需求。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种法医学硅藻检验方法，包括如下步骤：

S1、分别取0.15-0.19份磺胺二甲嘧啶、12-16份丙烯酸、25-35份丙烯酰胺、0.8-1份N’N-亚甲基双丙烯酰胺、0.8-1份过硫酸铵和35-45份去离子水于烧杯中充分混合，经氮气除氧后，将其填充到由两片载玻片形成的夹板空间中，置于60℃的烘箱中聚合反应3h，得薄膜状的印迹水凝胶；

S2、将步骤S1所得的印迹水凝胶浸泡在10％的醋酸溶液中，并超声振荡5-10min，以去除其中的模板分子磺胺二甲嘧啶；

S3、将步骤S3所得的印迹水凝胶浸泡在待检测样品内5-10min后取出，置于光学显微镜下观察；采用人工识别方式或计算机自动化识别方式对滤膜上的硅藻或所拍摄的图片进行检查、分类和统计处理。

优选地，所述待检验样品为水样、气管内溺液或组织器官的消解液。

本发明具有以下有益效果：