[发明专利]分泌抗甘蔗花叶病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

本发明公开了一种分泌抗甘蔗花叶病毒云南株系单抗的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。以纯化的甘蔗花叶病毒(SCMV)粒子为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗SCMV云南株系单克隆抗体的杂交瘤细胞株22A6，其保藏号为CGMCC No.12007。该杂交瘤细胞株分泌的单抗腹水的间接ELISA效价达10^‑7，抗体类型及亚类为IgG1，kappa轻链。该单抗与36kDa的SCMV外壳蛋白有特异性免疫反应。利用22A6单抗为核心建立检测玉米中SCMV的ACP‑ELISA和dot‑ELISA方法，这两种方法检测检测病叶的灵敏度分别达到1:163840和1:5120倍稀释(w/v,g/mL)。该杂交瘤细胞株22A6及其单抗的获得和血清学检测方法的建立为该病毒病的诊断和检测、抗病育种及科学防控提供物质和技术支撑。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗甘蔗花叶病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单抗的应用。

背景技术

甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)是引起玉米矮花叶病和甘蔗花叶病的病原。玉米矮花叶病于1963年首先在美国俄亥俄州大发生，随后美国多达37个州均相继报道了该病毒病。1968年玉米矮花叶病在我国河南新乡和安阳爆发，给当地造成了巨大的损失，仅辉县的粮食损失就达当年全县粮食总产量的33.53％，随后我国的其他地区也相继发现了该病，如黑龙江、辽宁、北京、上海、浙江、广西和台湾等省(市区)，其中以华北和西北危害较为严重。而甘蔗花叶病是一种严重危害甘蔗生长的世界性甘蔗病毒病害，最早于1892年在印度尼西亚的爪哇发现，随后在阿根廷、波多黎各、美国、古巴、中国等国家严重流行，现已在全世界蔗区普遍发生，成为危害甘蔗生产最严重的病毒性病害之一，严重影响甘蔗的产量和品质。

SCMV是马铃薯Y病毒属的重要成员之一，病毒粒子呈线状，无包膜，长750nm，宽13nm，其基因组由一长约9.6kb的单链正义RNA组成。RNA基因组只有单一的大开放阅读框(ORF)，编码一个约350kDa的多聚蛋白前体，在病毒编码的三种蛋白水解酶(Pl、HC-Pro和NIa-Pro)的作用下被水解成至少10个成熟的功能蛋白，从N端到C端依次为PI、HC-Pro、P3、6K1、CI、6K2、VPg、NIa-Pro、NIb和CP。近年又发现了第11个可能存在的蛋白PIPO。病毒粒子的致死温度为55-60℃，稀释限点为10³-10⁵倍，室温下可体外存活1-2天。SCMV可以经病株汁液摩擦、蚜虫、真菌等传播，也可经病株种子和玉米花粉传播。SCMV寄主范围仅限于禾本科植物，但所涉及的范围较广。Rosenkranz等对SCMV的寄主范围做了系统研究，共测定了39属293种禾本科植物对SCMV的侵染性，结果发现SCMV能侵染200种以上的禾本科植物。我国的史春霖等对北京地区的SCMV作了寄主范围测定，在供试的21种禾本科植物中，发现能被SCMV侵染的有画眉草、野雀麦、虎尾草、蟋蟀草、小米、黍、稗、马唐、青狗尾草、高粱、大油芒、矛叶荩草、玉米等13种，不能侵染大麦、小麦、黑麦、金丝雀麦草、约翰逊草、燕麦、草原看麦娘、水稻。玉米在整个生育期均可感染甘蔗花叶病毒，幼苗期发病时先在心叶基部出现点条状褪绿斑点，随后沿叶脉扩展至全叶，最终形成全株叶片花叶症状，随着病情的发展，叶片将形成明显的黄绿相间条纹症状，最终全叶失绿；拔节期发病时，先在心叶基部出现褪绿斑点，随后扩展至全叶成为典型的花叶症状；植株发育后期感病株叶片提早变黄，能抽穗结籽，但籽粒少；重病株则多数表现早枯，几乎颗粒不收。甘蔗感病后，叶片呈现大小不一、黄绿相间的嵌纹或条斑，种苗萌芽率下降，分蘖减少，生长缓慢，节间变短，品质变劣，蔗糖结晶率下降。