[发明专利]一种猪瘟病毒的检测引物和荧光定量RT-PCR检测方法

权利要求书

1.一种猪瘟病毒的检测引物，其特征在于，包括上游引物和下游引物，

上游引物QCSFV-F，序列为：CCCTCCAGCGACGGCCG；

下游引物QCSFV-R，序列为：ACTTAGACCACCCAGGGAG。

2.一种含有权利要求1所述的检测引物的猪瘟病毒的荧光定量RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增反应体系为25μL：SYBR?PremixExTaq（2×）：12.5μL；QCSFV-F：1μL，浓度为0.1μM；QCSFV-R：1μL，浓度为0.1μM；DNA模板：2μL；ddH₂O:8.5μL。

3.一种利用权利要求2所述的试剂盒对猪瘟病毒的荧光定量RT-PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）引物的设计与合成：

上游引物QCSFV-F，序列为：CCCTCCAGCGACGGCCG；

下游引物QCSFV-R，序列为：ACTTAGACCACCCAGGGAG；

（2）将待测样本匀浆，离心，取上清进行总RNA提取；

（3）将步骤（2）以总RNA为模板，反转录合成总cDNA，总cDNA样品保存至-80℃，备用；

（4）将步骤（3）总cDNA、阳性对照品和阴性对照品分别为模板，在荧光定量PCR仪上进行PCR扩增；

（5）PCR反应结束后，记录样品的Ct值和起始DNA拷贝数。

4.根据权利要求3所述的猪瘟病毒的荧光定量RT-PCR检测方法，其特征在于，步骤（4）所述的PCR扩增程序为：95℃预变性10分钟，再以39个循环进行PCR扩增，扩增条件为95℃变性15秒，60℃退火30秒，72℃延伸30秒，最后再先降到65℃持续5秒钟，再升到95℃，最后再增加0.5℃结束。

5.根据权利要求3所述的猪瘟病毒的荧光定量RT-PCR检测方法，其特征在于，步骤（4）所述的阳性对照品为已知猪瘟病毒感染的临床组织样品中获得的总cDNA，阴性对照品为ddH₂O。

6.根据权利要求3所述的猪瘟病毒的荧光定量RT-PCR检测方法，其特征在于，步骤（2）所述的待测样本为肺、脾、肾、淋巴结或者血清。