[发明专利]一种蜱传莱姆病伯氏疏螺旋体检测试剂及应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种蜱传莱姆病伯氏疏螺旋体的检测试剂及应用。

(二)背景技术

莱姆病(LD)是由硬蜱属(Ixodes)传播的自然疫源性疾病，其病原体是呈革兰氏阴性的伯氏疏螺旋体(Borreliaburgdorferisensulato)，包括3个致病基因型B.burgdorferisensustricto(美洲型)、B.garinii(亚洲型)和B.afzelii(欧洲型)。莱姆病可引起皮肤、关节、心血管和中枢神经系统组织等多系统感染，但由于基因组序列的差异(G.,LehmannR.,RomualdiA.,PradellaS.,Schulte-SpechtelU.,SchilhabelM.,WilskeB.,SühnelJ.,andPlatzerM..2004.ComparativeanalysisoftheBorreliagariniigenome.NucleicAcidsRes.32,6038-6046.)，三种基因型所引起的临床表现症状相差较大，美洲型B.burgdorferisensustricto主要引起莱姆关节炎，欧洲型B.afzelii主要侵犯皮肤组织，而亚洲型B.garinii主要引起神经功能紊乱(BuschU.,Hizo-TeufelC.,BoehmerR.,FingerleV.,NitschkoH.,WilskeB.,andPreac-MursicV..1996.ThreespeciesofBorreliaburgdorferisensulato(Borreliaburgdorferisensustricto,B.afzelii,andB.garinii)identifiedfromcerebrospinalfluidisolatesbypulsed-fieldgelelectrophoresisandPCR.J.Clin.Microbiol.34,1072-1078.；SteereA.C..2001.Lymedisease.N.Engl.J.Med.345,115-125.；SteereA.C.,CoburnJ.,andGlicksteinL..2004.TheemergenceofLymedisease.J.Clin.Invest.113,1093-1101.)。

莱姆病被世界卫生组织列为应重点防治研究的新发现传染病之一，在 我国的分布也相当广泛，在20多个省、自治区、直辖市都有报道，由于 临床症状复杂易于误诊，致残率较高，已成为我国一种重要的虫媒传播疾 病(万康林，张哲夫，张金声，窦桂兰，王宏英，侯学霞，朱桂凤.1998. 中国20个省、区、市动物莱姆病的初步调查研究.中国媒介生物学及控制 杂志.9,366-370.)。但是迄今为止，还未见检测哺乳动物是否感染莱姆病 螺旋体的有效方法。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种蜱传莱姆病伯氏疏螺旋体的检测试剂及检测 方法，首先获得高表达感染因子的狭义伯氏疏螺旋体(B.burgdorferisensu stricto)和伽氏疏螺旋体(B.garinii)，然后将培养菌体离心收集沉淀，制 备全菌抗原，再将全菌抗原进行SDS-PAGE分离后转印至微孔基膜，解 决了高表达抗原性强的菌体的培养及对哺乳动物感染莱姆病螺旋体的筛 选检测问题。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种蜱传莱姆病伯氏疏螺旋体检测试剂，所述检测试剂由 狭义伯氏疏螺旋体(B.burgdorferisensustricto)全菌抗原和伽氏疏螺旋 体(B.garinii)全菌抗原组成，优选所述狭义伯氏疏螺旋体全菌抗原和伽 氏疏螺旋体全菌抗原体积比为1:1(以蛋白分离前菌体量计，菌体含量比 为1:1)。

进一步，所述狭义伯氏疏螺旋体全菌抗原制备方法为：将狭义伯氏疏 螺旋体菌株接种至BSK-II培养基，在33-37℃、5％CO₂恒温培养箱培养 至菌体浓度1-2×10⁸个/ml，获得培养液；然后将培养液在4℃，3200rcf 离心25min，收集沉淀并用质量浓度0.9％NaCl水溶液重悬清洗两次，最 终获得菌体沉淀用2×SDS上样缓冲液在沸水浴中裂解10min，4℃离心， 取上清，获得狭义伯氏疏螺旋体全菌抗原。