[发明专利]mir-1299及其成熟miRNA的新用途

说明书

本发明涉及mir‑1299及其成熟miRNA的新用途。发明对转移性骨肉瘤患者及健康对照人群进行测序，获得其miRNA和mRNA的表达数据，筛选出候选的miR‑1299及其靶基因C5AR1、ITPRIP。进一步的荧光定量实验结果显示miR‑1299及其靶基因与骨肉瘤密切相关，抑制miR‑1299的表达能有效抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。本发明为临床提供很好的骨肉瘤转移诊疗靶点，具有很好的实际应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的涉及mir-1299及其成熟miRNA的新用途，更具体的涉及mir-1299及其成熟miRNA的新用途在诊治骨肉瘤转移中的新用途。

背景技术

miRNA是一种内 源性非编码小分子，通过特异性结合靶基因来调控基因的表达。其调控的主要方式有两种：一种是与靶基因mRNA的3’UTR不完全互补配对，阻断靶基因的翻译，从而调节基因表达；另一种是与siRNA类似，当miRNA与mRNA完全互补配对时，Ago2蛋白通过切割mRNA直接导致其降解，实现基因沉默。总之，当前认为miRNA以何种方式与目的基因作用和miRNA 与目的基因的配对程度有关。miRNA与目的基因配对不完全时，miRNA就以抑制目的基因的表达发挥作用；miRNA与目的基因某段序列配对完全时，就可能引起目的基因在互补区断裂而导致基因沉默。另外，miRNAs有时候也导致组氨酸修饰和启动子区的DNA甲基化，从而影响靶基因的表达。研究表明miRNA 参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等，具有重要的基因表达调控作用。

骨肉瘤(osteosarcoma，OSA)是常见的恶性骨肿瘤，由恶性增殖的肉瘤细胞直接产生肿瘤性骨样组织或不成熟骨，其组织学特点是增生的梭形肿瘤细胞直接产生骨样基质或不成熟骨，几乎所有骨肉瘤转移均经血液转移至肺，少数转移至脑、肾等内脏器官及经淋巴结转移。骨肉瘤的侵袭和转移严重影响患者的生活质量和预后。基因水平的治疗已经成为广大学者的研究热点，但是目前仍缺少骨肉瘤诊断和治疗的有效靶标，进一步寻找分子生物标记，将具有重要的理论和临床应用价值。同时如能获得骨肉瘤血清诊断标志物，将对骨肉瘤的诊断和治疗带来深远的影响。

本发明基于高通量测序方法，对5例转移性骨肉瘤患者及5名健康对照人群进行测序，获得其miRNA和mRNA的表达数据，进而进行生物信息学分析，选取后备miRNA和mRNA进行分子生物学验证及靶标验证，结果显示，本发明提供的miR-1299及其靶基因与骨肉瘤密切相关，可用于骨肉瘤的临床诊断及预防检测，具有很好的实际应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供mir-1299及其成熟miRNA在制备诊断和/或防治骨肉瘤试剂中的应用。miR-1299的序列见序列表SEQ ID NO 1，mir-1299序列见序列表SEQ ID NO 2。

进一步，骨肉瘤为转移性骨肉瘤。优选的，诊断和/或防治骨肉瘤试剂为诊断和/或防治骨肉瘤细胞侵袭和转移的试剂。

进一步，诊断骨肉瘤试剂包括基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测骨肉瘤样本中mir-1299及其成熟miRNA的转录或基于免疫检测方法检测骨肉瘤样本中mir-1299及其成熟miRNA调控的靶基因的表达情况，优选采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测骨肉瘤样本中mir-1299 及其成熟miRNA的转录；采用ELISA和/或胶体金试纸条检测骨肉瘤样本中 mir-1299及其成熟miRNA调控的靶基因的表达情况。优选所述mir-1299及其成熟miRNA调控的靶基因为C5AR1和/或ITPRIP。