[发明专利]一种绿色木霉突变株的培养方法

权利要求书

1.一种绿色木霉突变株的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)绿色木霉菌株的培养与纯化：先从野外植物腐烂残体的水溶液取样，于26℃接种于PDA固 体培养基上培养3～5天，筛选并鉴定出绿色木霉菌株，经二代连续培养出纯化绿色木霉 菌株；

(2)纯化绿色木霉菌株的扩大培养：纯化绿色木霉菌株再经液态PDA培养基中扩大 培养，离心去清液，测定活性，再用二级纯水洗涤，以8000r/min离心15min，取沉淀并 重复一次扩大培养，离心去清液，测定活性，再用二级纯水洗涤，以8000r/min离心15min， 取沉淀吹干后保存于冰箱暗处；

(3)纯化绿色木霉菌株的诱变：将步骤(2)中离心后的清液放入PDA培养基中，再 以几丁质或者结晶羧酸纤维素钠为反应底物，以秋水仙碱或者硫酸二乙酯作为诱变剂，进 行诱变，诱变终止后，经离心取沉淀物，置于暗处稳定4～6h，即得绿色木霉突变株；其 中诱变剂的浓度为0.005～0.08wt％；诱变时间为6～120h。

2.根据权利要求1所述的绿色木霉突变株的培养方法，其特征在于，所述步骤(2) 中，按照重量百分比，液态PDA培养基由以下物质配置而成：马铃薯2～3％；鱼蛋白粉0.5～ 3.3％；FeSO₄0.01～0.03％；KH₂PO₄0.02～0.20％；MgSO₄0.05～0.35％；Na₂B₂O₇·10H₂O0.025～ 0.05％；Na₂SeO₃0.025～0.05％，ZnSO₄0.01～0.02％，余量为水。

3.根据权利要求2所述的绿色木霉突变株的培养方法，其特征在于，所述液态PDA培 养基的pH值调至5.8～6.5，培养温度为27±1.0℃，培养时间为5天。

4.根据权利要求1所述的绿色木霉突变株的培养方法，其特征在于，所述步骤(3) 中，按照反应底物与发酵物的质量体积比为10g/L，添加反应底物。

5.根据权利要求1所述的绿色木霉突变株的培养方法，其特征在于，所述步骤(3) 中，诱变剂的浓度为0.01～0.05wt％，诱变时间为30～80h。

6.根据权利要求5所述的绿色木霉突变株的培养方法，其特征在于，所述步骤(3) 中，诱变剂的浓度为0.03wt％，诱变时间为48～60h。

7.根据权利要求6所述的绿色木霉突变株的培养方法，其特征在于，所述步骤(3) 中，诱变剂的浓度为0.03wt％，诱变时间为48h。

8.根据权利要求1～7任一所述的绿色木霉突变株的培养方法，其特征在于，还包括 (4)绿色木霉突变株的鉴定，加入浓度为0.5～1.5wt％的蔗糖作引子，启动孢子的萌发。