[发明专利]薏苡组织培养快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及薏苡组织培养快繁技术，属于植物培育技术领域。

背景技术

薏苡为禾本科薏苡属(coix.L.)作物，其籽实(俗称薏米)营养丰富，可作食用和药用，全属共有10种，目前我国共报道该属有1种1变种，即川谷和薏苡。当前，薏苡产业的发展主要存在的问题有品种单一、病害严重、产量低等，严重制约其发展；解决以上存在问题一般在粮食作物中常用做法就是通过在它的农艺性状中导入优良基因使其性状得到有效改良，但遗传转化的成功需要高效再生体系的建立，而植物组织培养是遗传转化中一个基础而重要的环节，因此，建立高效再生遗传转化体系需借助植物组织培养技术手段来完成。

植株组织培养技术指植株在无菌条件下，将其组织、细胞、胚胎、原生质体等一系列为外植体在人工配制的培养基上进行诱导培养，当给予的培养条件适宜时，诱发愈伤组织、潜伏芽等产生，并形成完整的植株的过程。该技术起源于1902年，是由德国植物学家Haberlandt提出“植物细胞具有全能性”的理论作为基础，该理论的提出为植物组织培养技术发展提供了广阔的前景，其后被广泛应用在花卉、农作物、果木、种质资源保存等多领域。植物组织培养技术是目前植物快繁中的最有效的途径之一，具有繁殖周期短、繁殖系数高，便于大规模生产，该过程具有低生产成本的优势，在重要粮食作物中也被成熟应用，并培育出一大批新品种。组织培养及再生研究在玉米上的应用就是为了能够高频率地将外植体诱导出愈伤组织，加速体细胞再生，促进玉米外源基因转化。因此将该项技术成功地应用于薏苡种质资源的保存、遗传转化体系建立以及脱毒组培苗生产等方面都应该具有重要的意义。

近年来，薏苡组织培养技术主要是对愈伤组织诱导与再分化、花药组培养方面的工作，对于薏苡组织培养技术中存在的愈伤诱导分化效率低、诱导成苗效果差等技术有待进一步优化。因此，优化薏苡组织培养技术和建立成熟的薏苡遗传转化体系是薏苡研究中的重要一环，为薏苡基因组学和基因功能的研究奠定基础。

发明内容

本发明的目的是为实现薏苡种质资源的保存、建立遗传转化体系以及脱毒组培苗生产而提供一种薏苡组织培养快繁方法。

本发明的技术方案如下：

本发明的这种薏苡组织培养快繁方法包括如下步骤：首先选取薏苡外植体进行消毒处理，将消毒处理过的薏苡外植体放入薏苡愈伤分化培养基中进行培养分化；培养出薏苡愈伤组织后，再通过薏苡愈伤继代培养基进行加强薏苡愈伤继代培养；然后通过薏苡再分化培养基进行薏苡再分化培养；通过薏苡再分化使薏苡达到成苗的时候采用薏苡成苗培养基进行培养；薏苡成苗后通过薏苡生根培养基进行薏苡生根培养。

其中，消毒处理采用的试剂为升汞、次氯酸钠、酒精。以薏苡种子为外植体时，消毒处理方法为先将外植体用浓度为75%的酒精浸泡1 min，无菌水冲洗2~3次，加入浓度为0.1%的升汞浸泡15 min或加入浓度为10%的次氯酸钠浸泡20 min，再用无菌水冲洗3~5次即可。

其中，薏苡愈伤分化培养基为MS+2,4-D 3.0mg/L+6-BA1.0mg/L。薏苡愈伤继代培养基为MS+2，4D 2.0mg/L+6-BA0.5mg/L。薏苡再分化培养基为MS+6-BA 4.0mg/L+2,4D 0.4mg/L。薏苡成苗培养基为MS+ZT 2.0mg/L+2，4D 0.4mg/L+KT 1.0mg/L。薏苡生根培养基为1/2MS+IBA0.5mg/L。

本发明的这种薏苡组织培养快繁方法愈伤诱导分化效率高、诱导成苗效果好，可以实现薏苡种质资源的保存、建立遗传转化体系以及脱毒组培苗生产，值得推广。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1：按以下步骤进行：

1、选取薏苡种子为外植体并进行消毒处理，消毒处理是用75%酒精浸泡1min，无菌水冲洗2次，加入0.1%升汞浸泡15 min，用无菌水冲洗3次。

2、用消毒处理过的薏苡外植体放入薏苡愈伤分化培养基进行培养分化，该薏苡愈伤分化培养基为MS+2,4-D 3.0mg/L+6-BA1.0mg/L。

3、通过培养出薏苡愈伤，在同时加强薏苡愈伤继代培养，采用的薏苡愈伤继代培养基为MS+2，4D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L。

4、通过薏苡愈伤继代，进行薏苡再分化最佳培养，采用的薏苡再分化培养基为MS+6-BA 4.0mg/L+2,4D 0.4mg/L。