[发明专利]补阳还五汤有效部位群及其应用

说明书

本发明属于医药技术领域，涉及多种中药混合化合物的用途，具体涉及一种补阳还五汤有效部位群在诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的应用。这种有效部位群是从药材中提取出苷类化合物、总生物碱、当归多糖、红花黄色素和柚皮素有效部位。经研究显示，这种补阳还五汤有效部位群可以在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞，该有效部位群可应用于治疗神经系统疾病的药物中。

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及多种中药混合化合物的用途，具体涉及一种补阳还五汤有效部位群及其在诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的应用。

背景技术

骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells， BMSCs)是来源于骨髓组织中的非造血细胞 ，具有来源容易获取 、不受伦理限制，广泛的增殖分化能力，易于分离、培养、扩增、纯化，免疫原性弱，免疫耐受性强，体外基因转染率高 ，并能稳定高效的表达外源基因等优点。因此，MSCs成为一种比较理想的种子细胞。近年来研究报道MSCs在体内可分化成神经元样细胞，在体外，应用碱性成纤维因子(bFGF )、二巯基乙醇(BME )、二甲基亚砜(DMSO )、丁羟茴醚(BHA )或表皮细胞生长因子 (EGF) 、维甲酸(RA )等为诱导剂，可以将大鼠和人的BMSCs诱导为神经元样细胞 。MSCs 取材方便，易从自体获得，回植后不会发生免疫排斥反应；易于在体外分离、培养和扩增；体外转染率高并能稳定高效的表达外源基因，因此是理想的种子细胞。这为神经系统损伤和退行性疾病的治疗提供了新的思路。由于DMSO 、B-巯基乙醇等化学合成品对 MSCs 有很强的向神经细胞诱导作用，但明显的毒性、致畸性和致癌性限制了应用。而中药有几千年的临床经验为基础，其毒副作用相对较小。

中药方剂补阳还五汤临床上用于治疗缺血性卒中后遗症，现代药理学研究发现其有调节免疫、抗炎调节脂质代谢、扩张脑血管，改善微循环、改善血流变学指标，抗凝血及抑制血栓形成、抗自由基、神经保护等作用。在动物体内移植MSCs的同时给与补阳还五汤干预能提高MSCs的存活率、归巢率及分化率。但中药方剂成分复杂，其发挥作用具有“多因、多效、多靶点”的特点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种补阳还五汤有效部位群及其在诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的应用，该补阳还五汤有效部位群可应用于治疗神经系统疾病药物中。该有效部位群可促进骨髓间充质干细胞分化和诱导骨髓间充质干细胞分化成神经元样细胞。

既然我们在背景技术描述了中药方剂补阳还五汤临床上用于治疗缺血性卒中后遗症，现代药理学研究发现其有调节免疫、抗炎调节脂质代谢、扩张脑血管，改善微循环、改善血流变学指标，抗凝血及抑制血栓形成、抗自由基、神经保护等作用。经过发明人多年的研究，进一步试验，发现在前期研究利用序贯法寻找补阳还五汤中各成分的LD50，使用正交设计方法测得其最佳配伍剂量，已由补阳还五汤方中提取到各有效部位群研制成补阳还五汤有效部位群（active principle region of Buyang Huanwu decoction apr-BYHWD），并进一步研究发现apr-BYHWD可以在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞，且其诱导效果优于补阳还五汤原方，于是发明人推测该有效部位群可应用于治疗神经系统疾病药物中。

本发明提供的一种补阳还五汤有效部位群在诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的应用，所述的补阳还五汤有效部位群为：苷类化合物、总生物碱、当归多糖、红花黄色素和柚皮素；补阳还五汤有效部位群的制备方法步骤如下：

（1）苷类化合物和柚皮素有效部位的分离纯化：取黄芪、赤芍和地龙，加乙醇，回流提取，过滤，得到药渣A，备用；滤液回收乙醇，调整至每1ml相当于0.5-3g药材的浓缩液，浓缩液过大孔树脂柱吸附后，用水水洗，之后用乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得苷类化合物和柚皮素有效部位；