[发明专利]一种半夏块茎的试管培养方法

说明书

技术领域

本发明属于植株培养技术领域，具体涉及一种半夏块茎的试管培 养方法。

背景技术

半夏Pinelliaternata(Thunb)Breit.为天南星科植物，块茎入药，为 大宗常用中药材。性温，味辛，有毒。归脾、胃、肺经。具有燥湿化 痰，降逆止呕，消痞散结之功效。主治咳喘痰多，呕吐反胃，胸脘痞 满，头痛眩晕，夜卧不安，瘿瘤痰核，痈疽肿毒。现代药理及临床研 究表明：半夏具有抗癌、抗生育和抗早孕、抗心率失常等作用，可治 疗食管、贲门癌梗阻，冠心病，宫颈糜烂，寻常疣，急性乳腺炎等症。

半夏生于山地、农田、溪边或林下；分布于我国大部分地区。作 为运用广泛的大宗中药材，随着市场用量的有增无减，半夏野生资源 逐年锐减，已不能满足日益增长的市场需求，人工栽培势在必行。块 茎类药材繁殖率低，种质易退化，自然生长周期长，栽培成本高。

现在半夏的栽培通常采用块茎繁殖、珠芽繁殖、种子繁殖等传统 方法。生长周期长、繁殖率低、种质易退化是在半夏生产中突出的问 题。

发明内容

本发明的目的是提供一种半夏块茎的试管培养方法，利用组织培 养技术，由外植体直接诱导出小块茎，作为种苗栽种，可提高繁殖率， 防止种质退化；缩短其生长周期，有效降低栽种成本。

本发明所采用的技术方案是，一种半夏块茎的试管培养方法，包 括以下步骤：

步骤1、消毒和接种：取半夏的幼嫩的叶、茎，洗衣粉水洗后， 自来水冲洗净，用蒸馏水加吐温-80两滴浸泡10min，在超净工作台 内用70％酒精消毒10s，漂白粉过饱和溶液上清液浸泡15min，0.05％ 砷汞浸泡4～6min，无菌水冲洗4～6次，无菌滤纸吸去表面水分， 将叶、茎切一伤口，叶分成1cm×1cm的大小，茎分为1.0～1.5cm 长的小段，再将有切口的一面接种到培养基上；

步骤2、诱导愈伤组织和芽分化及生根：在暗培养室培养5～8 天后，切口部分逐渐长出淡黄色颗粒状的愈伤组织，到第10～20天 时形成多个芽聚生在一起的芽丛，芽的基部逐渐扩大，渐渐长成带顶 芽的小块茎丛；第21～30天后，小块茎基部长出根；25～30天继代 一次；

步骤3、移栽：培养25～30天后，选取生长好的小块茎，用自 来水洗净培养基，移栽入花盆中；移栽大约12天后有苗破土，大约 4天后叶片展开，为单叶，大约7天后出现三出复叶；在移栽1个月 内长出三种叶形：单叶、三出复叶、正分化成三出复叶的单叶；挖出 块茎观察，发现块茎明显增大，并相应处于三种成形阶段：不规则块 状、圆球形、椭圆形，即移栽成功。

进一步地，步骤2中暗培养室培养的培养条件为：培养基MS+BA 1.0mg/L+NAA0.1～0.25mg/L在无光照条件下进行培养，诱导半夏 的茎、叶形成带顶芽的小块茎丛。

本发明的有益效果是：培养诱导形成的带顶芽的半夏块茎与野生 半夏在性状、显微特征及理化鉴别等多方面有相似性，初步证实组织 培养诱导形成半夏块茎，是对保护野生半夏资源，降低栽培成本，实 现人工集约化栽培，适应不断增长的市场需求的一种可行性尝试。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

本发明提供一种半夏块茎的试管培养方法，包括以下步骤：

步骤1、消毒和接种：取半夏的幼嫩的叶、茎，洗衣粉水洗后， 自来水冲洗净，用蒸馏水加吐温-80两滴浸泡10min，在超净工作台 内用70％酒精消毒10s，漂白粉过饱和溶液上清液浸泡15min，0.05％ 砷汞浸泡4～6min，无菌水冲洗4～6次，无菌滤纸吸去表面水分， 将叶、茎切一伤口，叶可分成1cm×1cm的大小，茎可分为1.0～1.5 cm长的小段，再将有切口的一面接种到培养基上。

步骤2、诱导愈伤组织和芽分化及生根：在暗培养室培养5～8 天后，切口部分逐渐长出淡黄色颗粒状的愈伤组织，到第10～20天 时形成多个芽聚生在一起的芽丛，芽的基部逐渐扩大，渐渐长成带顶 芽的小块茎丛；第21～30天后，小块茎基部长出根。25～30天可继 代一次。