[发明专利]降低干扰的方法

说明书

本发明涉及用于测定疑似含有所述分析物的样品中的分析物的方法，其包括a)使至少所述分析物的第一和第二捕获化合物与所述样品接触，其中所述第一和第二捕获化合物是不同的捕获化合物，且其中所述捕获化合物竞争结合所述分析物；b)使与所述样品接触的所述捕获化合物与指定剂接触，其中所述指定剂与所述分析物竞争结合所述捕获化合物；c)测定包含所述指定剂和捕获化合物的复合物的量；和d)基于步骤c)的结果测定样品中的所述分析物。本发明还涉及用于改善用于测定分析物的间接免疫测定的特异性的方法，其包括通过不同的捕获化合物替代至少10％的捕获化合物；其中被替代的捕获化合物与引入的捕获化合物竞争结合所述分析物。本发明还涉及与上述方法相关的试剂盒、设备和用途。

发明领域

本发明涉及用于测定疑似包含所述分析物的样品中的分析物的方法，其包括a)使至少所述分析物的第一和第二捕获化合物与所述样品接触，其中所述第一和第二捕获化合物是不同的捕获化合物，且其中所述捕获化合物竞争结合所述分析物；b)使与所述样品接触的所述捕获化合物与指定剂接触，其中所述指定剂与所述分析物竞争结合所述捕获化合物；c)测定包含所述指定剂和捕获化合物的复合物的量；和d)基于步骤c)的结果测定样品中的所述分析物。本发明还涉及用于改善用于测定分析物的间接免疫测定的特异性的方法，其包括通过不同的捕获化合物替代至少10％的捕获化合物；其中被替代的捕获化合物与引入的捕获化合物竞争结合所述分析物。本发明还涉及与上述方法相关的试剂盒、设备和用途。

相关技术

实验室测试，特别是免疫学测试，已成为疾病诊断中的无价工具。具体地，免疫测定已提供了在复杂混合物，例如体液诸如血液或血浆中特异性检测单一分析物或分析物组的可能性。然而，已经鉴定了免疫测定中的干扰的几个原因，例如，干扰物质与捕获化合物的交叉反应性，检测剂化合物与固相的非特异性结合，通过异嗜性抗体或特别是人抗小鼠抗体(HAMA)对捕获化合物和检测剂化合物的“桥接”结合，仅举几例(参见例如Park &Kricka (2013), Ch. 5.3- Interferences in Immunoassay, in The ImmunoassayHandbook (Fourth Edition), 由David Wild编辑, Elsevier, Oxford: 403;Schiettecatte (2012), Interferences in Immunoassays, Advances in ImmunoassayTechnology, Dr. Norman H.L. Chiu (Ed.))。

在竞争性免疫测定中，包含在样品中的分析物与标记的分析物(指定剂)竞争结合捕获化合物，其通常为抗体，或者在测试血清样品中例如病原体的抗体的存在的情况下，所述病原体的抗原。在样品中分析物的浓度高的情况下，则存在强烈竞争，导致指定剂与捕获化合物的结合减少，引起信号降低，其取决于测试形式，导致定量或定性测试结果。本领域已知的免疫测定的缺点是用作捕获化合物的抗原也可以被来自样品的干扰化合物结合。这些干扰化合物与指定剂竞争结合捕获化合物的表位。根据竞争的严重程度，假测试结果是可能的，其引起相应免疫测定的特异性降低。如果使用潜在地甚至由具有大量构象表位的几个亚单位组成的复合捕获化合物，例如病毒衣壳，则特异性的这种降低可以是特别显著的。在这种情况下，消除干扰的经典方法，例如，添加干扰化合物的替代靶标，可能是低效的。

在非竞争性免疫测定中，通过使分析物与特异性结合分析物并携带标记本身或作为携带标记的第二分子的靶标的化合物接触来检测分析物。因此，在非竞争性免疫测定中，通过测定分析物和携带标记的检测剂化合物之间形成的复合物的量来测定分析物的量。因此，可能如上所述面临类似的特异性问题。

仅免疫学轻微不同的抗原(例如通过在不同表达系统中产生，不同的氨基酸序列，糖基化的差异，纯化和重折叠程序的差异以及缓冲液和储存条件的差异)具有各自的干扰范围。因此，导致用抗原X1进行免疫测定的错误结果的样品可以在用抗原X2的测试中提供正确的结果，反之亦然。因此，频繁用抗原交换不同抗原不会导致特异性的改善，但仅导致引起错误结果的样品范围的变化。

待解决的问题