[实用新型]一种脱氧雪腐镰刀烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A复合免疫亲和柱

说明书

技术领域

本实用新型属于分析检测技术领域，具体涉及一种脱氧雪腐镰刀烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A复合免疫亲和柱。

背景技术

真菌毒素是由真菌生长产生的有毒次生代谢产物，在粮食或饲料生产过程中，由于温度、湿度等因素的影响，为真菌的生长繁殖提供适宜条件，从而引起真菌毒素的污染。据世界粮农组织报告，全球每年约有25%的农作物遭受真菌及其毒素污染，约有2%的农作物因污染严重而失去营养和经济价值。真菌毒素对人类和动物健康可产生严重的影响，许多国家在近几十年来制定了诸多有关食品和饲料中真菌毒素的法规，以保护人类和动物的健康，并保障生产者和贸易商的经济利益。到2003年末，大约有100个国家已经为食品和饲料中的真菌毒素制定了各种特定的限量标准，而且该数目还在继续增加之中。脱氧雪腐镰刀烯醇、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素是粮食饲料中常见的真菌毒素，在被真菌污染的谷物中，经常可以同时检测出。

脱氧雪腐镰刀烯醇（呕吐毒素，DON）和玉米赤霉烯酮同属镰刀霉毒素，主要是由镰刀菌属真菌产生，常见于小麦，玉米等谷物中。可对人、畜产生广泛的毒性效应，如食欲降低、体重减轻、代谢紊乱等。脱氧雪腐镰刀烯醇污染谷物的状况非常普遍，是检出率和检出量最高的真菌毒素之一，人畜摄入了被脱氧雪腐镰刀烯醇污染的食物后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳和反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡，但不同的动物对脱氧雪腐镰刀烯醇的敏感程度不一，猪最敏感。另外脱氧雪腐镰刀烯醇对免疫系统有影响，有明显胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遗传毒性，但无致癌、致突变作用。玉米赤霉烯酮是一种酚的二羟基苯酸的内酯结构，主要由禾谷镰刀菌产生，粉红镰刀菌、窜珠镰刀菌、三线镰刀菌等多种镰刀菌也能产生，首先由赤霉病玉米中分离得出。玉米赤霉烯酮具有雌激素样作用，具有较强的生殖毒性和致畸作用，可引起动物发生雌激素亢进症，导致动物流产、死胎、返情等生殖异常现象，对家禽、猪、牛和羊的影响较大，给畜牧业带来很大的经济损失。2003年止，据世界粮农组织公布已有19个国家制定了食物中玉米赤霉烯酮的限量标准。赭曲霉毒素A在真菌毒素中分布最广。赭曲霉毒素A已被国际癌症研究机构确定为ⅡB类致癌物的一种霉菌毒素，它能致癌、致畸、致突变、破坏免疫系统，对肝、肾脏造成损害，还可导致神经中毒。

目前，真菌毒素的检测方法主要有薄层色谱法，免疫分析法及精密仪器分析法。其中，免疫分析方法主要有酶联免疫法和胶体金免疫层析法，可以对样品中的真菌毒素进行快速的定量、定性检测；精密仪器分析法主要有高效液相色谱法、超高效液相色谱法和液质联用法，可以对样品中的真菌毒素进行精确定性、定量分析，是真菌毒素检测的确认方法。但是，由于需要检测样品种类繁多，影响因素各种各样，要想使这些检测方法能够达到理想的检测效果，则需要将样品进行不同程度的前处理。

免疫亲和柱是利用抗原抗体反应的高特异性和高亲和力，用适当的方法将特异性的抗体结合到固相载体上，以便有效的分离、纯化目标物质，具有选择性高、富集能力强等优点，用于真菌毒素检测的样本前处理，可以更好的消除影响因素，减小基质效应，减少假阳性和假阴性的出现。

实用新型内容

本实用新型的目的在于提供一种脱氧雪腐镰刀烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A复合免疫亲和柱，用于样品中脱氧雪腐镰刀烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A检测的样品前处理方法。

本实用新型所述的免疫亲和柱由柱管、琼脂糖凝胶、筛板、上下帽组成；琼脂糖凝胶上偶联了抗脱氧雪腐镰刀烯醇单克隆抗体和抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体，由上下各一块筛板固定在柱管底部；柱管的两端分别盖有上帽和下帽。其所用琼脂糖凝胶为CNBr-Sepharose 4B，每根亲和柱含量为0.3ml-0.5ml；每根亲和柱所含抗脱氧雪腐镰刀烯醇单克隆抗体、抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体和抗赭曲霉毒素A单克隆抗体分别为0.8 mg -2.5mg、0.5 mg -2mg和0.4 mg -1mg；柱管为3ml或1ml的柱管。

本实用新型所述的免疫亲和柱的制备方法，按照下述步骤进行：

（1）抗体预处理：将纯化好的抗脱氧雪腐镰刀烯醇单克隆抗体、抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体和抗赭曲霉毒素A单克隆抗体置于pH8.3含有0.5M NaCl的0.1M NaHCO3缓冲液中透析12h；

（2）凝胶活化：称取适量的CNBr-Sepharose 4B干粉，用1mM盐酸浸泡使其充分溶胀后，在砂心漏斗中用pH8.3含有0.5M NaCl的0.1M NaHCO3缓冲液快速抽洗3次；