[发明专利]油菜蜜酚类特征标识物的鉴别方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种油菜蜜酚类特征标识物的鉴别方法，属于食品科学领域。

背景技术

蜂蜜(honey)是蜜蜂采集蜜源植物分泌的花蜜酿造而成的天然甜物质。已有研究表明，蜂蜜具有抗菌、抗氧化、抗感染、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等功效，因此蜂蜜深受广大消费者喜爱。然而，由于蜂蜜价格较高，目前国内市场上蜂蜜质量良莠不齐，一些不法商家在经济利益驱使下，对蜂蜜进行掺假，以达到削减成本谋取暴利的目的。蜂蜜掺假包括两种方式：(1)向天然蜂蜜产品中直接添加糖浆类物质；(2)将低价蜂蜜添加到或直接冒充高价蜂蜜出售，也称为品种掺假。蜂蜜成分复杂且不同植物源的蜂蜜成分相近，因此蜂蜜品种掺假是蜂蜜掺假形式中最难鉴别的一种。蜂蜜中的酚类化合物种类及含量与蜜源植物的种类密切相关，确定不同种类蜂蜜的酚类标识物对于蜂蜜的品种掺假鉴别有重要意义。

油菜(BrassicacampestrisL.)适应性强，耐寒耐旱，作为蜜源植物在我国种植面积最广，产量最大，素以“铁蜜源”著称。油菜花期为25-30天，开花时间东南、西南地区2至3月份，长江中下游地区3至4月份，黄河以北地区6至7月份。油菜蜜呈浅琥珀色，略混浊，有辛辣味和油菜花的香气，极易结晶，结晶后呈乳白色。由于产量高，相对于其他品种的蜂蜜，油菜蜜价格低廉，故常被用来掺假到高价蜂蜜中。

发明内容

本发明目的是提供一种油菜蜜酚类特征标识物的鉴别方法，该方法使用高效液相色谱串联二极管阵列检测器(HPLC?DAD)确定油菜蜜的酚类特征标识物，使用四级杆飞行时间质谱仪对该酚类特征标识物分子量等信息进行鉴定，从而确定油菜蜜酚类特征标识物，为鉴别油菜蜜作为低价蜜掺入或直接冒充高价蜜出售提供可靠依据。

油菜蜜酚类特征标识物的确定是鉴别油菜蜜作为低价蜜掺入或直接冒充高价蜜出售的关键，为此，发明人开展了以下实验：

（1）选取五种常见高价蜜包括枣花蜜、龙眼蜜、荔枝蜜、椴树蜜和苕子蜜样品加蒸馏水充分溶解，使用盐酸溶液调节其pH值为2，得到蜂蜜样品水溶液，将蜂蜜样品水溶液注入有XAD?2型树脂的层析柱内，依次用pH值为2的盐酸水溶液和蒸馏水冲洗，去除糖类等极性物质，酚类化合物保留在树脂上，用甲醇进行洗脱，通过减压浓缩的方式去除甲醇洗脱液，所得残留物用甲醇溶解、定容，配制成供试样品溶液，密封后4℃避光保存；油菜蜜样品做相同处理；

（2）使用HPLC-DAD对枣花蜜、龙眼蜜、荔枝蜜、椴树蜜、苕子蜜和油菜蜜样品的供试溶液进行测定分析，确定油菜蜜样品保留时间为50.49min的特征色谱峰；

（3）采集不同产地的油菜蜜样品，按照步骤（1）方法提取酚类化合物；

（4）使用HPLC-DAD对不同产地的油菜蜜样品的供试溶液进行测定分析，保留时间为50.49min的色谱峰强度最大且出现在所有供试油菜蜜样品溶液中；

（5）使用高分辨质谱仪QTOF-MS分析油菜蜜样品中保留时间为50.49min的特征峰，得到该特征性化合物的分子量为362；

上述液相色谱条件为：色谱柱：ZorbaxSB-C18(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：0.15%的甲酸溶液和甲醇；流动相流速：1.0mL/min；洗脱方式：梯度洗脱；检测波长：254nm、280nm、290nm、320nm；柱温：30℃；

上述质谱条件为：离子源:电喷雾电离源(ESI);数据采集模式:负离子模式;数据采集范围：m/z100~1000；离子源参数:裂解电压：130V；毛细管电压：4kV;载气压力：45psig;气化室温度350℃；干燥气(N₂)体积流量10L/min。

通过上述实验，发明人获得了一种蜂蜜中油菜蜜酚类特征标识物的鉴别方法，包括以下步骤：

（1）将蜂蜜加蒸馏水充分溶解，使用盐酸溶液调节其pH值为2，得到蜂蜜样品水溶液，将蜂蜜样品水溶液注入有XAD?2型树脂的层析柱内，依次用pH值为2的盐酸水溶液和蒸馏水冲洗，去除糖类等极性物质，酚类化合物保留在树脂上，用甲醇进行洗脱，通过减压浓缩的方式去除甲醇洗脱液，所得残留物用甲醇溶解、定容，配制成供试样品溶液，密封后4℃避光保存；