[发明专利]一种肺癌辐射抗性细胞株的构建方法

权利要求书

1.一种肺癌辐射抗性细胞株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

①将肺癌细胞置于37℃、5％CO₂培养箱内常规培养，当其覆盖培养瓶60～70％并处于对数生长期时，接种于六孔板中，把六孔板置于照射野中心，六孔板底面覆盖1.5cm厚的组织等效填充物，照射源为医用直线加速器，6MV-X线，机架旋转180°，在室温条件下射线从下方垂直入射，剂量率300cGy/min，源皮距SSD＝100cm，第1次予以2Gy照射；

②照射后更换新鲜培养基，待细胞覆盖培养瓶80％以上时，胰酶消化，传代两次以上；

③传代后置于37℃、5％CO₂培养箱内培养2～3天，待细胞再次覆盖培养瓶60～70％后，再次给予2Gy照射；

④每一次照射后的细胞均按上述步骤②和步骤③的方法传代并培养至稳定状态后再进行照射，依次增加照射剂量达4Gy、6Gy、8Gy和10Gy，每剂量均照射2次，总剂量达60Gy，继续培养及传代5代以上至细胞形态、增殖稳定，冻存备用。

2.如权利要求1所述的肺癌辐射抗性细胞株的构建方法，其特征在于，所述六孔板中每孔细胞接种量为5×10⁵个。

3.如权利要求1或2所述的肺癌辐射抗性细胞株的构建方法，其特征在于，所述医用直线加速器为Varian 23-EX医用直线加速器。

4.如权利要求1或2所述的肺癌辐射抗性细胞株的构建方法，其特征在于，所述X线的照射野大小为30cm×30cm。

5.如权利要求3所述的肺癌辐射抗性细胞株的构建方法，其特征在于，所述X线的照射野大小为30cm×30cm。