[发明专利]多粘芽胞杆菌KN-03及其培养方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种多粘芽胞杆菌及其培养方法和用途。

背景技术

植物青枯病和枯萎病素有植物“癌症”之称，是危害最大、损失最重、分布最广的世界性土传病害，目前国内外尚无能同时防治青枯病、枯萎病等细菌性和真菌性土传病害的有效农药，更没有可同时防治青枯病、枯萎病等细菌性和真菌性土传病害及叶部病害的微生物杀菌剂。例如：CN101712941A公开的多粘芽胞杆菌只可用于防治植物青枯病。CN102851243A公开的多粘芽胞杆菌可用于制备广谱性抑制病原真菌和病原细菌的生防制剂，所述病原真菌为苹果轮纹病菌、棉花黄萎病菌、桃褐腐病菌、小麦纹枯病菌、百合基腐病菌和甘蓝枯萎病菌；所述病原细菌为黄瓜角斑病菌和桃冠瘿病菌；所述植物真菌病害为枯萎病。CN102851250A公开的多粘芽胞杆菌只能有效防治烟草黑胫病。

另外，现有的多粘芽胞杆菌产芽胞能力很差，造成细菌生产效率低、周期长，成本高，从而限制了它的应用。例如：CN101869181A公开的一种1千亿活芽胞每克多粘芽胞杆菌原粉的制备方法，其发酵液芽胞数仅为20亿cfu/ml，发酵过程中即使补充碳源和氮源，发酵液的芽胞数也只能达到25亿cfu/ml。

发明内容

本发明的目的是针对上述缺陷，提供一种能同时防治多种作物病害的多粘芽胞杆菌，本发明还提供所述多粘芽胞杆菌的培养方法和用途。

本发明所提供的多粘芽胞杆菌(BaciIllus polymyxa)KN-03，保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏编号为CCTCC NO.M2012077。

本发明进一步提供所述多粘芽胞杆菌的培养方法，该方法包括以下步骤：

(1)菌种活化：挑取一环多粘芽胞杆菌KN-03于斜面培养基上，将接种好的斜面置于30℃温控培养箱中培养72h；

(2)种子培养：取步骤(1)活化的多粘芽胞杆菌KN-03一环接种于种子培养基中，将接种好的种子培养液在温度为30℃、转速为150rpm的条件下培养14-18h；

(3)发酵培养：将培养好的种子液接入发酵培养基中，在温度为30℃、转速为150rpm的条件下培养60h，得到多粘芽胞杆菌KN-03发酵液，

所述斜面培养基的成份是：葡萄糖20g，去皮土豆200g,琼脂粉15g，定容至1L，pH7.0；

所述种子培养基的成份是：蔗糖5-15g/l、酵母抽提物5-20g/l、大米粉8-16g/l、玉米粉5-20g/l、麸皮10-30g/l、氯化钙0.1-1g/l、氯化锰0.09-1g/l、硫酸镁3-10g/l，pH7.2-7.5；

所述发酵培养基的成份是：蔗糖25-50g/l、酵母抽提物3-10g/l、大米粉8-16g/l、玉米粉12-20g/l、麸皮8-20g/l、玉米浆10-20g/l、豆粕6-15g/l、玉米浆10-20g/l、氯化钙0.1-1g/l、氯化锰0.09-1g/l、硫酸镁3-10g/l，pH7.2-7.5。

室内抑菌活力测定结果表明：本发明所提供的多粘芽胞杆菌KN-03对番茄青枯病菌、辣椒枯萎病菌、水稻黄萎病菌、玉米全蚀病菌、油菜核盘病菌、小麦赤霉病菌、番茄灰霉病菌、番茄早疫病菌和黄瓜炭疽病菌有明显地抑制效果。

室内毒力测定结果表明：10亿CFU/克多粘芽胞杆菌KN-03可湿性粉剂对姜青枯病菌和西瓜枯萎病菌表现出了较高的抑制作用。对姜青枯病菌的最小抑制浓度为5mg/L，效果优于蜡质芽胞杆菌可湿性粉剂；对西瓜枯萎病菌的EC50为16.8772mg/L，EC90为69.9283mg/L，效果优于枯草芽胞杆菌可湿性粉剂。

田间效果试验表明：本发明所提供的多粘芽胞杆菌KN-03菌剂能有效预防草莓青枯病和西瓜枯萎病的发生，且增产效果明显，对草莓的增产率达到18.40％，对西瓜的增产率达到137％。

本发明的有益效果是：

1.本发明提供的多粘芽胞杆菌能同时有效防治作物多种细菌性和真菌性土传病害及叶部病害，包括青枯病、枯萎病、黄萎病、核盘病、全蚀病、赤霉病、早疫病、灰霉病和炭疽病，而且防治效果优于其它微生物杀菌剂。

2.本发明提供的多粘芽胞杆菌繁殖能力强，具有很强的产胞能力，结合本发明所提供的培养方法，在不需要补充碳源和氮源的前提下，发酵液的芽胞数就能达到30亿cfu/ml，而且发酵周期短、生产成本低，处于国内领先水平。

3.本发明提供的多粘芽胞杆菌不仅能防治作物病害，还具有明显的促生长作用，能显著提高作物产量。

附图说明