[发明专利]一种检测冠心病的血清学生物标志物miR-19a及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测冠心病的血清学生物标志物miR-19a及其用途，具体涉及一种冠心病的生物标志物——血清miR-19a分子及其在冠心病筛查与临床诊断中的应用，属于检验医学、临床医学、生物技术、生物化学及分子生物学领域。

背景技术

冠心病（CAD）在全世界范围内尤其是在一些发展中国家拥有较高的发病率和死亡率。据WHO预测，直至2030年，每年将会有23,600,000人死于心血管疾病。冠心病病理学过程复杂，通常被认为是遗传和环境因子共同作用的结果。在过去几十年中，很多因素，如吸烟、高血压、糖尿病（DM）、动脉硬化、肥胖和节食等被证实与冠心病有关，但冠心病的具体发病机理仍不清楚。越来越多的证据说明炎症在冠心病的发病过程中扮演着重要作用，其发病具有明显的家族聚集性，大量的遗传易感基因在疾病的发生发展过程中起着重要作用，所涉及的条件十分复杂，该疾病确切的发病机制至今仍不清楚，从而限制了冠心病诊治有效易感基因的发掘。miRNA广泛介导基因的转录后调控，被证实在心血管疾病中充当多种多样的角色，或可反映心脏和血管对损伤的易感性，及对持久心血管功能的依赖性等，而目前的主要研究则集中于miRNA与心律失常、心肌肥厚、血管新生和心肌细胞凋亡等的关系，对冠心病的系统作用机制还少见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测冠心病的血清学生物标志物miR-19a， 其miRNA序列为：

miR-19a: UGUGCAAAUCUAUGCAAAACUGA；

本发明的另一个目的是上述冠心病检测的血清学生物标志物miR-19a的用途：作为判断冠心病发生的生物标志物试剂的应用，包括制备用于筛查冠心病或辅助冠心病病理鉴定、临床诊断和生化检验的试剂盒；所述试剂盒包括引物系统/引物探针系统：

所述引物系统由miR-19a的cDNA扩增引物和锚定引物组成；

所述引物探针系统有miR-19a的cDNA扩增引物和探针组成；

检测该标志物的技术为反转录-荧光定量PCR技术，所述荧光定量PCR为DNA染料法或TaqMan探针法；miR-19a的cDNA扩增引物为：

AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA；

mR-19a的探针由以下核苷酸序列组成：

(6-FAM) AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA(MGB)；

在荧光定量PCR检测方法中，使用保守性miRNA的miR-19a作为内参照基因，其cDNA扩增引物和探针为：

引物：AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA

探针：(6-FAM) AGUUUUGCAUAGUUGCACUACA(MGB)。

本发明涉及生物标志物miR-19a分子与冠心病的发生发展密切相关，利用miR-19a分子作为预测冠心病发生和判断冠心病发展程度的生物标志物，与目前常规的病理分型诊断冠心病发病和预后相比，可以更加个体化、准确地预测冠心病的早期发病情况和恶性程度。

附图说明

图1：冠心病组与对照组（Non-CAD）血清miR-19a水平比较（***P < 0.0001）；

图2：血清miR-19a的ROC曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如《分子克隆》(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。 

实施例1

受试群体

受试对象来自医院诊治的患者。冠心病患者入选标准：既往有心肌梗死病史，或者冠状动脉造影检查至少有一支冠状动脉狭窄≥50%；年龄大于18岁且小于80岁。排除标准：静息时有心绞痛；合并严重心力衰竭患者（EF < 35%）；合并严重瓣膜疾病或心肌病患者。一共选取冠心病组180例，非冠心病组169例，所有受试对象均签署知情同意书。

表1 病例基本信息表

实施例2

血浆miRNA提取

（1）采集1 ml患者的新鲜血液置于抗凝管中，4℃，3000 rpm离心10min，收集上层的血浆；