[发明专利]盐藻的收集与保种方法

说明书

技术领域

本发明属于水产养殖领域，尤其涉及一种盐藻的收集与保种方法。

背景技术

盐藻Dunaliella salina是一种单细胞真核藻类，属绿藻门、绿藻纲、杜氏藻目、杜氏藻科、杜氏藻属，是迄今为止发现的最耐盐真核生物之一，属高盐逆境生物，适应性强，繁殖快，自然生活环境多为盐池、盐湖等高盐水域，特殊的环境造就了独特的生长机制。藻体卵圆、椭圆或梨形，长18-28μm，宽9.5-14μm，因没有纤维质细胞壁，外形在不同盐度、光照、温度等环境下变化较大，蛋白核及淀粉粒也随环境不同。细胞前部一般凹陷，在凹陷处生出两条等长鞭毛，比细胞长约1/3；体内有一杯状色素体，主要是叶绿素和类胡萝卜素(以β-胡萝卜素为主)。早期细胞呈草绿色，条件不良时产生β-胡萝卜素，藻体呈红色。其独特的颜色会把湖水染成红色，在西非塞内加尔首都以北35公里的瑞特巴湖，因盐藻作用，湖水呈粉红色，获得“玫瑰湖”外号。盐藻属光合自养生物，富含β-胡萝卜素，最高可达干重14％，远高于其它动植物，是β-胡萝卜素最好的天然产源，具有很大开发价值。盐藻含有70多种人体所需物质和微量元素，比例与人体的体液、细胞浆液相吻合，能改善身体机能，保护DNA，增强免疫力。用现代科技手段从盐藻中提取、浓缩、精制而成的多种营养成分称为“盐藻素”，中国中医科学院的研究和临床试验表明，盐藻素对调节血压、降低血脂、降血糖、糖尿病有显著预防和辅助治疗作用；盐藻素中富含的类胡萝卜素直接抑制癌细胞生长，可有效治疗化学致癌剂诱发的肿瘤，减轻化疗、放疗的疼痛和不适症状并可降低癌症转移和复发机率；盐藻素对酒精肝和脂肪肝有明显改善作用；盐藻中类胡萝卜素能保持、修复上皮组织，尤其对胃部常见病胃溃疡、胃炎和萎缩性溃疡及上呼吸道炎症和口腔溃疡均有很好弥合作用；盐藻素能明显提高机体免疫力，防治白内障，改善视力，对夜盲症、干眼病也有较好治疗效果。

盐藻收集传统上采用离心机来离心藻液，最后得到牙膏状的藻泥。该方法优点是没有污染和杂质，获得率较高，但缺点是由于离心力作用，易打碎细胞，胞液外流，造成损失，更大的缺点是离心设备昂贵，即使一台每小时处理0.5立方米藻液的离心设备也需要120万元，而且运行费用高，即离心所用电费太高，占整个微藻培养工艺流程支出的80％以上，严重限制着盐藻养殖业的发展。为了解决这个难题，我发明了一种利用黄泥巴和小苏打来凝聚藻细胞的方法，该法不仅操作简便，费用少，设备简陋而且对细胞没有伤害，简单易行，没有污染，效益高，可规模化生产。

关于盐藻保种方法，传统上采用低温、低光照液体保存法，也就是在低温、低光照条件下，降低藻细胞新陈代谢和活动性，每隔15-25天更换一次培养液。该法操作麻烦，费时费力，保种时间短，易污染，细胞死亡率高，技术要求高，弄不好易导致保种失败。为了克服这个缺点，我发明了一种低温冰冻保种法，不仅保种时间长，操作方便，不易污染，而且花钱少，冰冻时添加了甘油、二甲亚砜等冷冻保护剂，细胞成活率从原来的21％提高到92％，经济效益高，具有推广价值。

发明内容

为了克服目前技术的不足，本发明提供了一种盐藻的收集与保种方法，方法如下：

一种盐藻的收集与保种方法，步骤如下：

将培养完毕的盐藻液，按1升藻液加入100毫克甲壳素和50毫克聚丙烯酰胺的量加入甲壳素和聚丙烯酰胺，搅拌30分钟，再按1升藻液加入80毫克小苏打(即碳酸氢钠)的量加入小苏打，再搅拌30分钟，后将藻液置于黑暗中静置、沉淀24小时，可见底部有牙膏状沉淀物，即为目的产物藻泥，弃去上清液可得；因上清液中还有少量盐藻细胞，将上清液搅拌20分钟，再沉淀24小时，再取牙膏状沉淀物即可；

盐藻保种用的培养液，配方如下：

硝酸铵4毫克，磷酸二氢钠7毫克，脯氨酸2毫克，丙酮酸盐5毫克，柠檬酸钾2毫克，甘氨酸甜菜碱12毫克，谷氨酸钠4毫克，乙酸钠4毫克，甘露醇6毫克，葡萄糖9毫克，人尿1.5毫升，甘油3毫克，二甲亚砜0.5毫克，链霉素0.1毫克，煮沸冷却后的海水1000毫升；