[发明专利]一种草果与草豆蔻的指纹图谱鉴别方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药鉴别领域，具体涉及一种草果与草豆蔻药材的指纹图谱鉴别方法。

背景技术

草果别名草果子，草果仁，始载于《本草纲目》，2010年版《中国药典》记载草果为姜科植物草果Amomum tsao-ko Crevost et Lemaire的干燥成熟果实，具燥湿温中，除痰截疟的功效；而草豆蔻为姜科植物Alpinia Katsumadai Hayata的干燥近成熟的种子，具燥湿行气，温中止呕的功效；草果与草豆蔻功效不同，临床应用也有差异，但由于两者同为姜科药材，其外形、气味非常相似，常常容易混淆使用。为区别鉴定草果与草豆蔻，余南才等人从性状，来源，显微，薄层色谱等方面对草果与草豆蔻进行了鉴别比较。

目前草果与草豆蔻药材的鉴别主要是根据外观气味及显微形态特征等传统方法来进行，这些方法有的比较繁琐，有的不够客观，有时仍不容易准确鉴别；因此，建立一种与国际接轨的、客观先进、快速准确的草果与草豆蔻药材的指纹图谱鉴别方法，具有重要的意义。

近年来，色谱指纹图谱已成为国际公认的用于鉴别与控制中药材质量的最有效的手段，它是现代分析科学的优秀成果与中医药整体综合观的有机融合，是一种到目前为止在国际上较为认可的利用现代科学技术手段所能达到的用于表现中药复杂体系特性的最好方法。GC-MS指纹图谱是近年来发展起来的用于中药挥发油成分分析与鉴别的一种方法，与普通色谱指纹图谱相比，它不仅可给出类似普通色谱指纹图谱的峰型特征，还可同时对各色谱峰的多个组份同时进行快速定性，给出各个特征指纹峰的成分以及结构。因此，在中药定性与鉴别方面，GC-MS指纹图谱比普通色谱指纹图谱的选择性更强，具有更多的优势。最近曾有应用水蒸汽蒸馏或超临界流体提取草果或草豆蔻挥发油，然后用GC-MS方法测定其挥发油指纹图谱的报道，但由于这些方法通常所需的药材量较多，提取过程比较麻烦，提取时间一般都比较长；而且水蒸汽蒸馏法因为温度高、提取时间长，可能还会造成部分有效成分的破坏及损失，均不适用于作为药材的快速鉴别方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种可用于准确快速鉴别草果与草豆蔻的指纹图谱鉴别方法。该法采用乙酸乙酯、二氯甲烷或石油醚为萃取溶剂，采用超声辅助萃取或冷浸提取制备供试品溶液，用GC-MS方法在一定条件下测得指纹图谱并用于草果与草豆蔻的鉴别。科学试验证明，该法简便、快速；所需药材量少，测得的指纹图谱特征及差异明显，重复性高，可用于草果和草豆蔻的准确快速鉴别与质量控制。

本发明的草果与草豆蔻药材的指纹图谱鉴别方法具体包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取草果和草豆蔻药材粉末4-6克，精密称定，分置于两个锥形瓶中，分别加入乙酸乙酯、二氯甲烷或石油醚20-30ml，冷浸24小时或超声辅助提取30-40分钟，放冷，加相应溶剂补足失去的重量，过滤，取续滤液置离心管中，用无水硫酸钠干燥去除水分，以13000r/min离心10分钟，取上清液，即得草果和草豆蔻药材的供试品溶液；

(2)色谱分析条件：弹性石英毛细管色谱柱，以高纯He为载气，流量1.0ml/min；进样口温度230℃-250℃；不分流进样；采用程序升温进行分析；

(3)质谱分析条件：电离方式为EI，电子能量70eV，检测器温度250℃-280℃，离子源温度230℃，四级杆温度150℃，倍增电压1782v，发射电流34.6μA，扫描质量范围：50-500amu；溶剂延迟3.0min；

(4)测定方法：分别取草果和草豆蔻的供试液各1μl，注入GC-MS联用仪，测定草果和草豆蔻的总离子流图，即得两药材的鉴别用指纹图谱。

经过研究，本发明优化的草果与草豆蔻药材的指纹图谱鉴别方法按以下步骤实施：

(1)供试品溶液的制备：取草果和草豆蔻药材粉末5克，精密称定，分置于两个锥形瓶中，分别加入乙酸乙酯20ml，超声辅助提取30分钟，放冷，加乙酸乙酯补足失去的重量，过滤，取续滤液置离心管中，用无水硫酸钠干燥去除水分，以13000r/min离心10分钟，取上清液，即得草果和草豆蔻药材的供试品溶液；

(2)色谱分析条件：HP-5MS UI弹性石英毛细管色谱柱，其规格为30m×0.25mm×0.25μm；载气为高纯He，纯度≥99.99％，流量1.0ml/min；进样口温度250℃；不分流进样；程序升温程序为：初始温度80℃，保持3min，以6℃/min升至180℃，保持3min；