[发明专利]一种西花蓟马成虫的解剖方法

说明书

技术领域

本发明涉及昆虫解剖领域，尤其涉及一种西花蓟马成虫的解剖方法。

背景技术

西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pergande)属于缨翅目，蓟马科，花蓟马属。西花蓟马的寄主范围较广，目前已知的有60个科的500多种植物，包括重要豆科、十字花科、葫芦科等蔬菜和菊科、凤仙花科、蔷薇科等花卉，随着西花蓟马的扩散蔓延，其寄主种类将会不断增加。

西花蓟马首次记载于1895年，源自美国和加拿大西部洛基山脉，20世纪80年代后，随着国际贸易迅速发展，西花蓟马随着花卉、苗木、蔬菜等的调运，迅速向外扩散，成为一种世界性的农业害虫。已广泛分布于美国、加拿大、夏威夷、澳大利亚、哥伦比亚、英国、匈牙利、波兰、斯洛伐克、日本、瑞典、中国等69个国家。2003年6月，西花蓟马在北京市海淀区大棚辣椒上暴发，随后该虫在我国各地陆续有报道，目前已成为我国露地和温室蔬菜生产的重要害虫，且危害逐年加重。

西花蓟马以锉吸式口器刺吸寄主植物的叶、芽、花和果实，尤其喜欢取食寄主植物的幼嫩部位。被取食叶片初呈白色斑点，正面似斑点病害，背面则有黑色虫粪，严重为害时，叶片变小、嫩叶皱缩卷曲，甚至黄化、干枯甚至凋萎。西花蓟马还能传播多种病毒病，其中危害性较大的是番茄斑点萎蔫病毒和凤仙坏死斑点病毒，这两种病毒能感染多种重要的农作物，造成重大的经济损失。

西花蓟马有很强的环境适应性，而且繁殖力也很强。近年来，随着全球气温变暖，再加上农药的滥用，导致抗高温、抗药种群的泛滥，西花蓟马的泛滥带来农业灾害，需对其进行研究，目前尚未存在有效的西花蓟马解剖方法。

鉴于上述缺陷，本发明创作者经过长时间的研究和实践终于获得了本创作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种西花蓟马成虫的解剖方法，用以克服上述技术缺陷。

为实现上述目的，本发明提供一种西花蓟马成虫的解剖方法，所述的方法包括以下步骤：

步骤a，收集西花蓟马成虫，短时浸泡于盛有PBS缓冲液的培养皿中，静置，收集底部的虫体；

步骤b，用细毛笔将虫体固定在盛有薄层缓冲液的凹玻片凹槽处，虫体的腹面向上，放于解剖境下解剖；

步骤c，用解剖针挑开腹部末端几节的节间膜；

步骤d，左手用镊子按住头部，右手用另一把镊子夹往腹部末端轻轻向后拉开，这样，整个生殖器官和消化器官就可以完整地暴露在外。

进一步地，所述PBS缓冲液为无菌缓冲液，其配方的各化合物的浓度为：

NaH₂PO₄  0.2mol/L

Na₂HPO₄  0.2mol/L

PH为7.4。

进一步地，在上述步骤a中，虫体在PBS缓冲液中浸泡时间为4～5min。

进一步地，上述步骤d中，应保证凹槽处有薄薄的缓冲液，这样就能借助渗透压和表面张力将内部器官拉出。

进一步地，解剖过程涉及的试剂和器材经高压灭菌，即于122℃，0.4MPa的压力下，灭菌1小时。

进一步地，收集卵巢，加入液氮后研磨，按照常规方法可以抽提出DNA或RNA，用于分子生物学分析。

与现有技术相比较本发明的有益效果在于：本发明的优点为：在PBS缓冲缓冲溶液浸泡下，可使得虫体变得软化，很容易用解剖针挑破节间膜，且不会破坏内部结构；用镊子夹往腹部末端轻轻向后拉时能保证结构的完整程度。进而更全面深入的了解虫体内部器官的构造和卵巢的发育进程。

采用本解剖方法，可以比较完整的得到西花蓟马成虫的内部结构，便于了解锉吸式口器昆虫内部器官的生理结构；对不同时期卵巢结构的观察，便于了解卵巢的发育进程，为西花蓟马的预测预报提供了理论基础。

具体实施方式

以下，对本发明上述的和另外的技术特征和优点作更详细的说明。

本发明西花蓟马成虫的解剖方法，可以适用于不同发育历期的虫态，操作方便；而且利用该方法得到的生殖系统的结构完整，没有损伤。

其具体过程为：

步骤a，收集西花蓟马成虫，短时浸泡于盛有PBS缓冲液的培养皿中，静置，收集底部的虫体；

步骤b，用细毛笔将虫体固定在盛有薄层缓冲液的凹玻片凹槽处，虫体的腹面向上，放于Leica KL2000 LED解剖境下解剖；

步骤c，用解剖针挑开腹部末端几节的节间膜；