[发明专利]一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及体外免疫诊断试剂领域，尤其涉及一种检测尿液中β-hCG的时间分辨免疫荧光试剂盒及其制备方法和应用，实现对尿液中β-hCG含量的定量检测。

背景技术

人绒毛膜促性腺激素(hCG)，是由胎盘绒毛膜的合体滋养层产生的一种糖蛋白，β亚单位是特异性抗原，其结构与其它垂体前叶激素不同。

质量是一家生产型企业的立足之本。许多做hCG测试笔的体外诊断公司，需要利用含一定浓度β-hCG标准品进行测试笔功能性检测，从而确认此批测试笔是否达到标准，能否出售，这是一个关键质量控制点。标准品若不合格，有可能对测试笔的性能进行误判，对企业产生不利的影响。因此有必要发展一种灵敏度高、检测范围广、稳定性好的定量检测试剂盒，用于监测含一定浓度的β-hCG标准品的性能。

目前市售的试剂盒大多以酶联免疫为主，以血清为标本进行定量检测β-hCG含量，灵敏度一般，检测范围偏窄，取样操作复杂、不方便。尿液中β-hCG含量的测定已经是体外快速检测产品的一项重要指标，通过尿液中β-hCG含量的多少，可直接判断出是否怀孕以及怀孕的周数，取样简单、便捷。作为早早孕体外快速检测产品的质控标准品，也是用尿液来配制或者标定的；容易引起疏忽的是：不管是正常男性或妇女的尿液中，本身就存在一定含量(极低水平)的β-hCG抗原。因此定量测定尿液中β-hCG的含量，可为标准品的准确性提供一种定量的保证，也可辅助早期判断妊娠、流产、宫外孕等。

时间分辨免疫荧光分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)，是利用具有独特荧光特性的镧系元素作为标记示踪物，代替酶、同位素等，成为发光免疫分析中的一种重要方法，具有灵敏度高、示踪物稳定、不受样品自然荧光干扰、无放射性污染等许多优点。

目前，对于采用时间分辨免疫荧光分析法检测尿液中β-hCG含量尚未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种检测尿液中β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，其灵敏度高、检测范围广、稳定性好，取样方便，快速。

本发明要解决的技术问题之二是提供该试剂盒的制备方法。

本发明要解决的技术问题之三是提供该试剂盒在检测β-hCG含量中的应用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

在本发明的一方面，提供一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，包括盒体和盒体上方的盒盖，所述盒体内设有放置包被抗β-hCG单克隆抗体的酶标板的隔层；所述盒体内设有放置试剂瓶的容器孔，所述容器孔内放置有：

装有分析液的试剂瓶；

装有清洗液的试剂瓶；

装有增强液的试剂瓶；

装有β-hCG校准品的试剂瓶；其中，β-hCG校准品的浓度已知，用于建立标准曲线；

装有标记的抗α-TSH单克隆抗体的试剂瓶。

作为本发明优选的技术方案，所述容器孔内还放置有：装有包被液的试剂瓶、装有封闭保护液的试剂瓶、以及装有洗脱液的试剂瓶。

作为本发明优选的技术方案，所述酶标板为带保护膜的96孔酶标板。

作为本发明优选的技术方案，所述抗β-hCG单克隆抗体的浓度为1-10μg/ml。

所述标记的抗α-TSH单克隆抗体的标记物可以采用本领域常用的标记物，例如镧系元素。作为本发明优选的技术方案，所述标记的抗α-TSH单克隆抗体的标记物优选是三价铕离子。

作为本发明优选的技术方案，所述标记的抗α-TSH单克隆抗体中抗体与标记物的标记重量比例是(6-10):1。

作为本发明优选的技术方案，所述β-hCG校准品为尿液配制的β-hCG标准品。

在本发明的另一方面，还提供了一种上述试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)抗β-hCG单克隆抗体包被酶标板的制备：

将抗β-hCG单克隆抗体在包被液中透析，再加入到酶标板上,于2-8℃包被48小时以上；用清洗液清洗酶标板后，加入封闭保护液，室温封闭20小时以上；甩干封闭保护液干燥密封，置于2-8℃冰箱备用；

(2)三价铕标记的抗α-TSH单克隆抗体的制备：

将抗α-TSH单克隆抗体，用标记液进行透析，取透析好的抗α-TSH单克隆抗体，用标记液稀释；将抗体加入到冻干的铕标记液中缓慢摇匀后置于2-8℃冰箱中过夜；用纯化柱纯化2-8℃过夜的标记液，收集标记物，加入0.1％BSA置于-80±10℃冷冻保存备用；

(3)β-hCG校准品的制备：