[发明专利]一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，包括盒体和盒体上方的盒盖，其特征在于，所述盒体内设有放置包被抗β-hCG单克隆抗体的酶标板的隔层；所述盒体内设有放置试剂瓶的容器孔，所述容器孔内放置有：

装有分析液的试剂瓶；

装有清洗液的试剂瓶；

装有增强液的试剂瓶；

装有β-hCG校准品的试剂瓶；

装有标记的抗α-TSH单克隆抗体的试剂瓶。

2.如权利要求1所述的一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述容器孔内还放置有：装有包被液的试剂瓶、装有封闭保护液的试剂瓶、以及装有洗脱液的试剂瓶。

3.如权利要求1所述的一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述酶标板为带保护膜的96孔酶标板。

4.根据权利要求1所述的一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述抗β-hCG单克隆抗体的浓度为1-10μg/ml。

5.根据权利要求1所述的一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述标记的抗α-TSH单克隆抗体的标记物是三价铕离子。

6.根据权利要求1或5所述的一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述标记的抗α-TSH单克隆抗体中抗体与标记物的标记重量比例是(6-10):1。

7.根据权利要求1所述的一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，其特征在于，所述β-hCG校准品为尿液配制的β-hCG标准品。

8.一种根据权利要求5所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)抗β-hCG单克隆抗体包被酶标板的制备：

将抗β-hCG单克隆抗体在包被液中透析，再加入到酶标板上,于2-8℃包被48小时以上；用清洗液清洗酶标板后，加入封闭保护液，室温封闭20小时以上；甩干封闭保护液干燥密封，置于2-8℃冰箱备用；

(2)三价铕标记的抗α-TSH单克隆抗体的制备：

将抗α-TSH单克隆抗体，用标记液进行透析，取透析好的抗α-TSH单克隆抗体，用标记液稀释；将抗体加入到冻干的铕标记液中缓慢摇匀后置于2-8℃冰箱中过夜；用纯化柱纯化2-8℃过夜的标记液，收集标记物，加入0.1％BSA置于-80±10℃冷冻保存备用；

(3)β-hCG校准品的制备：

用β-hCG干粉和阴性尿液配制浓度为0、15、25、37.5、50、75和100mIU/ml的β-hCG校准尿液，置于-80±10℃冷冻保存备用；

所述清洗液、分析液和增强液为市售商品。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述将抗体加入到冻干的铕标记液中，其中抗体与铕标记液的重量比例为(6-10)：1。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述用纯化柱纯化2-8℃过夜的标记液，收集标记物具体为：取纯化柱，用洗脱液洗脱平衡至少2小时，将2-8℃过夜的标记液全部转入柱子的顶端，重力自然洗脱，以0.25ml/管为单位进行收集。

11.一种根据权利要求1所述的试剂盒在检测β-hCG含量中的应用，其特征在于，该检测方法包括如下步骤：

(1)将β-hCG校准品和待检样品依次加入到抗β-hCG单克隆抗体包被的酶标板上，再加入分析液，震荡孵育；

(2)将清洗液用去离子水进行稀释，然后用已稀释的清洗液清洗酶标板并甩干；

(3)将纯化好的三价铕标记的抗α-TSH单克隆抗体，用分析液稀释，加入酶标板中，震荡孵育；

(4)用清洗液清洗酶标板并甩干；

(5)加入增强液，使用全自动时间分辨荧光免疫分析仪检测荧光信号；

(6)根据荧光数值建立标准曲线，将待检样品的荧光信号代入到标准曲线中，求得待检样品的浓度。