[发明专利]用于定量检测尘螨过敏原的酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于检测尘螨过敏原的酶联免疫试剂盒，具体是涉及一种用于定量检测尘螨过敏原DerP2和Derf2的酶联免疫试剂盒。

背景技术

尘螨是引起哮喘，过敏性皮炎和婴儿湿疹等多种变态反应性疾病的一种强烈过敏原。DerP2是来自尘螨(Dermatophagoidespteronyssinus)的一种最主要的特异性过敏原，80％—90％对尘螨过敏的病人对该过敏原都有很强烈的反应。检测尘螨裂解液中DerP2指标能够计算到空气中尘螨的含量，从而及时的预防过敏的发生，同时也为环境检测提供数据支持。

目前研发的检测螨类裂解液中过敏原的技术有毛细管电泳电化学检测技术和纳米磁性粒子酶联免疫测定技术。已有实例显示毛细管电泳电化学检测技术可高效的分离和检测粉尘螨制剂中DerP2含量，而纳米磁性粒子酶联免疫测定技术可以检测空气滤网和吸尘器中的灰尘中尘螨过敏原DerP2和Derf2的含量。

目前已有的相关检测技术中，毛细管电泳电化学检测技术需要非常专业且比较昂贵的检测器，推广起来不是很方便，而纳米磁性粒子酶联免疫测定成本较高，用碱性磷酸酶标记检测抗体进行检测灵敏性不够，因此采用夹心法ELISA，并且用生物素标记的抗体可以方便，快捷，灵敏的实现检测尘螨裂解液中过敏原的含量，该技术成熟且应用平台广泛，推广方便。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种能识别尘螨过敏原DerP2的单克隆抗体。

本发明所述的一种能识别过敏原DerP2的单克隆抗体，是由保藏号为CCTCCNO:C2014112的杂交瘤细胞株DerP2所分泌的。该杂交瘤细胞株DerP2保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址是中国湖北省武汉市武汉大学，保藏日期为2014年5月29日。

本发明的第二个目的在于提供一种用于检测定量检测尘螨过敏原DerP2和Derf2的酶联免疫试剂盒，该试剂盒能通过本发明所述的能识别过敏原DerP2的单克隆抗体来检测样本中的尘螨过敏原DerP2和Derf2，具有简便、快捷、实用、灵敏、高效的特点。

本发明所述的一种用于定量检测尘螨过敏原DerP2和Derf2的酶联免疫试剂盒，包括酶标板、标本稀释液、包被抗体、检测抗体、检测抗体稀释液、标准品、洗涤液、底物显色液、终止液；包被抗体为本发明所述的能识别过敏原DerP2的单克隆抗体；检测抗体为已标记HRP的抗DerP2多克隆抗体。

根据本发明所述的用于定量检测尘螨过敏原DerP2和Derf2的酶联免疫试剂盒的进一步特征，所述酶标板的包被抗体封闭液为pH7.2，含5％脱脂奶粉的0.1mol/L的磷酸盐缓冲液。

根据本发明所述的用于定量检测尘螨过敏原DerP2和Derf2的酶联免疫试剂盒的进一步特征，所述标本稀释液为15mM,pH6.5的PBS缓冲液，溶质及其在所述标本稀释液中的质量浓度或摩尔浓度或体积浓度如下：0.1-1％几丁质酶，2-4％蔗糖，150mMNaCl,0.2％吐温20。

根据本发明所述的用于定量检测尘螨过敏原DerP2和Derf2的酶联免疫试剂盒的进一步特征，所述检测抗体稀释液为15mM,pH7.4的PBS缓冲液，溶质及其在所述抗体稀释液中的质量浓度或摩尔浓度或体积浓度如下：0.5％酪蛋白，2-4％蔗糖，150mMNaCl，0.2％吐温20。

根据本发明所述的用于定量检测尘螨过敏原DerP2和Derf2的酶联免疫试剂盒的进一步特征，所述洗涤液为pH7.2，含0.5％吐温20、0.1mol/L的磷酸盐缓冲液。

根据本发明所述的用于定量检测尘螨过敏原DerP2和Derf2的酶联免疫试剂盒的进一步特征，所述底物显色液由显色液A和显色液B组成，显色液A液为过氧化氢，显色液B液为邻苯二胺或四甲基联苯胺。

根据本发明所述的用于定量检测尘螨过敏原DerP2和Derf2的酶联免疫试剂盒的进一步特征，所述终止液为2M硫酸溶液。

本发明所述的能识别过敏原DerP2的单克隆抗体，是由保藏号为CCTCCNO:C2014112的杂交瘤细胞株DerP2所分泌的。

本发明的第二个目的在于提供一种用于定量检测尘螨过敏原的酶联免疫试剂盒，该试剂盒能检测空气中收集的样本里尘螨过敏原DerP2和Derf2，具有简便、快捷、实用、灵敏、高效的特点。

本发明以上单抗和多抗为核心试剂与常规试剂组合，制成了能检测DerP2的酶联免疫试剂盒，结合上述酶联免疫方法，实现了对DerP2的酶联免疫检测。