[发明专利]一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的方法及试剂

说明书

本发明公开了一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的方法及试剂，包括洗涤液、菌体裂解液、包涵体溶解液、蛋白复性液‑I和蛋白复性液‑II。使用本发明诉述的包涵体溶解液可以显著提高从包涵体中获得可溶性白介素重组蛋白的得率，从而解决用大肠杆菌表达体系生产白介素所存在的问题。与现有技术相比，本发明不含有任何蛋白变性剂，这样有利于后续的蛋白复性；操作简单，可提升可溶性白介素蛋白得率达90％以上，相对常规使用蛋白变性剂法只能获得5‑20％具有明显优势，具有推广应用的价值。

技术领域

本发明涉及一种重组蛋白技术，尤其涉及一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的方法及试剂。

背景技术

白细胞介素,简称:白介素,(英文名:Interleukin,简写:IL),又称淋巴细胞活化因子是人体免疫系统调控的最关键蛋白质分子,目前已经发现有35个白介素。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化、炎症反应以及在肿瘤发生过程中起着非常重要的调控作用。白细胞介素在医学研究、新药开发等方面备受关注，其应用也越来越被重视，比如,白细胞介素-2(IL-2)已被用作抗肿瘤药,据GlobalInformationInc.报道去年世界上185家新药研发机构的746项肿瘤药研发项目中有258个目标药物与白介素-2传递路径相关(IL-2Signaling Pathway in Oncology DrugPipeline Update2011),可见白细胞介素应用前景非常看好。

目前市场上可获得的白细胞介素主要是通过基因工程生产出来的重组白介素蛋白。重组蛋白可以通过大肠杆菌表达体系来生产，也可以通过昆虫病毒表达体系或动物细胞表达体系来生产。大肠杆菌表达体系是具有蛋白表达量高、生产成本低等优点，同时也是上述几个表达体系中最成熟的应用最广的重组蛋白生产体系。然而，研究表明用大肠杆菌表达体系生产白介素时存在一个大问题：大部分白介素重组蛋白在大肠杆菌表达体系中以不可溶的包涵体形式存在。常规情况下，蛋白包函体可以用高浓度变性剂(如8M尿素)来溶解，然后经过透析复性来获得可溶性蛋白。可是，白介素重组蛋白的包涵体，即使用8M尿素也难完全溶解，得使用更加苛刻6M盐酸胍来溶解，但通过6M盐酸胍溶解的蛋白，复性比较困难且效果很差。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的方法及试剂。

本发明通过以下技术方案来实现上述目的：

本发明一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的试剂，包括洗涤液、菌体裂解液、包涵体溶解液、蛋白复性液-I和蛋白复性液-II，所述包涵体溶解液由pH值10-12的Tris-NaOH缓冲液、NaCl、Glycerol、EDTA、2-巯基乙醇和N-十二烷基肌氨酸钠组成。

具体地，所述包涵体溶解液由pH值10-12的10-300mM Tris-NaOH缓冲液、50-300mMNaCl、5-30％Glycerol、2-20mM EDTA、1-30mM2-巯基乙醇和0.05-0.5％N-十二烷基肌氨酸钠组成。

进一步，所述洗涤液由50mM Tris-HCl pH8、50mM NaCL、5％Glycerol、5mM EDTA、3mm2-巯基乙醇和0.5％Tween-20组成；所述菌体裂解液由50mM Tris-HCl pH8、50mM NaCL、5mM EDTA、3mm2-巯基乙醇和0.5％Tween-20组成；所述蛋白复性液-I由50mM Tris-NaOHpH11、50mM NaCL、5％Glycerol、6mM EDTA和5mM2-巯基乙醇组成；所述蛋白复性液-II由50mM Tris-HCl pH8、50mM NaCL、5％Glycerol、5mM EDTA、3mM2-巯基乙醇组成。