[发明专利]一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的方法及试剂

权利要求书

1.一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的试剂，其特征在于：包括洗涤液、菌体裂解液、包涵体溶解液、蛋白复性液-I和蛋白复性液-II，所述包涵体溶解液由pH值10-12的Tris-NaOH缓冲液、NaCl、Glycerol、EDTA、2-巯基乙醇和N-十二烷基肌氨酸钠组成。

2.根据权利要求1所述的一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的试剂，其特征在于：所述包涵体溶解液由pH值10-12的10-300mM Tris-NaOH缓冲液、50-300mM NaCl、5-30％Glycerol、2-20mM EDTA、1-30mM2-巯基乙醇和0.05-0.5％N-十二烷基肌氨酸钠组成。

3.根据权利要求1所述的一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的试剂，其特征在于：所述洗涤液由50mM Tris-HCl pH8、50mM NaCl、5％Glycerol、5mM EDTA、3Mm 2-巯基乙醇和0.5％Tween-20组成；所述菌体裂解液由50mM Tris-HCl pH8、50mM NaCl、5mM EDTA、3Mm 2-巯基乙醇和0.5％Tween-20组成；所述蛋白复性液-I由50mM Tris-NaOH pH11、50mMNaCl、5％Glycerol、6mM EDTA和5mM 2-巯基乙醇组成；所述蛋白复性液-II由50mM Tris-HCl pH8、50mM NaCl、5％Glycerol、5mM EDTA、3mM 2-巯基乙醇组成。

4.根据权利要求3所述的一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的试剂，其特征在于：所述包涵体溶解液中的20mM 2-巯基乙醇可采用5mM DTT替代。

5.根据权利要求3所述的一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的试剂，其特征在于：所述包涵体溶解液中的0.5％N-十二烷基肌氨酸钠可采用0.05％SDS替代。

6.根据权利要求1或2所述的一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的试剂，其特征在于：所述包涵体溶解液中的Tris-NaOH缓冲液可采用等pH值的碳酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液中的其中一种替代。

7.一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)离心收集经诱导表达白介素的大肠杆菌；

(2)加入洗涤液，混匀，重悬菌体，离心除去上清；

(3)加入菌体裂解液，混匀，重悬菌体，在冰上用超声波裂解菌体1-10秒，间歇进行1-5次，离心除去上清；

(4)加入洗涤液，混匀，重悬蛋白包涵体，离心除去上清；

(5)加入包涵体溶解液，混匀，重悬蛋白包涵体，离心收集上清，将该上清装入透析袋；

(6)将透析袋放入蛋白复性液-I中透析；

(7)进一步将透析袋转入蛋白复性液-II中继续透析；

(8)收集透析袋中蛋白液，便得可溶性白介素重组蛋白；

(9)检测复性后蛋白含量和纯度；

其中，步骤(5)中所述的包涵体溶解液由pH值10-12的Tris-NaOH缓冲液、NaCl、Glycerol、EDTA、2-巯基乙醇和N-十二烷基肌氨酸钠组成。