[发明专利]一种过表达苹果酸酶基因的重组载体及应用在审
| 申请号： | 201410329101.3 | 申请日： | 2014-07-10 |
| 公开（公告）号： | CN104131024A | 公开（公告）日： | 2014-11-05 |
| 发明（设计）人： | 李宏业;薛姣;杨维东;刘洁生 | 申请（专利权）人： | 暨南大学 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12N1/13;C12R1/89 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星;朱聪聪 |
| 地址： | 510632 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 苹果酸酶 基因 重组 载体 应用 | ||
1.一种过表达苹果酸酶基因的重组载体，其特征在于，包括筛选标记基因表达盒及目的基因表达盒；所述的筛选标记基因表达盒包括抗性筛选基因，在抗性筛选基因的上游融合了大肠杆菌P1启动子，抗性筛选基因的下游融合了大肠杆菌ccdB终止子；所述的目的基因表达盒包括三角褐指藻fcpC基因启动子、苹果酸酶基因、三角褐指藻fcpA基因终止子及一个Omega leader序列，所述的Omega leader序列在三角褐指藻fcpC基因启动子的下游；
所述的大肠杆菌P1启动子的序列如SEQ ID NO.1所示，大肠杆菌ccdB终止子的序列如SEQ ID NO.2所示，三角褐指藻fcpC基因启动子的序列如SEQ ID NO.3所示，苹果酸酶基因的序列如SEQ ID NO.4所示，三角褐指藻fcpA基因终止子的序列如SEQ ID NO.5所示，Omega leader序列如SEQ ID NO.6所示。
2.根据权利要求1所述的过表达苹果酸酶基因的重组载体，其特征在于，所述的目的基因表达盒，其中在三角褐指藻fcpC基因启动子和三角褐指藻fcpA基因终止子之间通过不依赖于连接反应的高效克隆方法引入上游XcmI序列和下游XcmI序列，形成了目的基因TA克隆位点，所述的XcmI序列如SEQ ID NO.7所示。
3.根据权利要求1所述的过表达苹果酸酶基因的重组载体，其特征在于，所述的目的基因表达盒，在三角褐指藻fcpA基因终止子前融合一个MYC标签序列，所述的MYC标签序列如SEQ ID NO.8所示。
4.根据权利要求1所述的过表达苹果酸酶基因的重组载体，其特征在于，所述的抗性筛选基因为氯霉素酰基转移酶基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。
5.权利要求1所述的过表达苹果酸酶基因的重组载体在构建高效的微藻生物产油器中的应用。
6.根据权利要求5所述的过表达苹果酸酶基因的重组载体在构建高效的微藻生物产油器中的应用，其特征在于，所述的微藻为三角褐指藻。
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