[发明专利]总状毛霉的新应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物领域，涉及一种总状毛霉的新应用，特别涉及总状毛霉在水解大豆异黄酮产生游离型苷元中的应用。

背景技术

大豆异黄酮具有防癌，防骨质疏松症，改善妇女更年期综合症，防心血管疾病等诸多生理功能，是近年来世界各国科学家研究的热点。大豆中的大豆异黄酮近99%是以β-葡萄糖苷形式存在，只有1%左右为游离型苷元。糖苷型的活性低，很难被人体直接吸收，必须要经过人体微生物的水解作用生成苷元形式才易被吸收。体外实验也表明，大豆异黄酮苷元比大豆异黄酮苷具有更好的雌激素样生物活性。因此，将结合型糖苷水解成游离型苷元是提高大豆异黄酮生理活性一个有效的手段。目前常用水解方法主要有酸水解、碱水解、酶水解。大豆异黄酮苷虽然可在碱性条件下水解成相应的苷元和葡萄糖，但碱水解所得到的大豆异黄酮苷元很不稳定，容易降解。酸水解效率虽高，但工业化生产条件要求严格，增加了基础建设的投资。相对而言酶水解条件比较温和，但单纯通过应用工业酶法生产苷元的成本都很昂贵。β-葡萄糖苷酶是广泛存在于人的消化道、植物和400多种微生物中的一种酶，可以水解异黄酮成为苷元。大豆自身也含有β-葡萄糖苷酶，但水解活性不强。但利用微生物发酵的方法可以提高大豆自身β-葡萄糖苷酶的活性，发酵不影响总异黄酮含量同时直接产生苷元，该法可大幅度降低成本，为工业化生产提供便利条件。

目前报道的可以产生游离苷元的微生物有：浅玫瑰链霉菌、红色糖多孢菌、灰色链霉菌、黑曲霉等。总状毛霉是真核类微生物，可以分泌蛋白酶，目前已经发现总状毛霉可以用于制备腐乳，以及具有转化甾体药物中间体的功能，国内外文献中尚未见总状毛霉在大豆异黄酮转化方面的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供了一株总状毛霉的新应用，用于水解大豆异黄酮产生游离型苷元。

本发明的第二目的是提供总状毛霉水解大豆异黄酮产生游离型苷元的方法。

本发明通过以下技术方案来实现：

一、一株总状毛霉在水解大豆异黄酮产生游离型苷元中的应用。

本发明中所采用的总状毛霉（M. racemosus）ACCC 0401，由中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物保藏中心（简称ACCC）鉴定。

二、上述的总状毛霉水解大豆异黄酮产生游离型苷元的方法，该方法包括以下步骤：

（1）总状毛霉的发酵；将总状毛霉在无菌的条件下接入斜面培养基，30℃培养72h。种子培养：无菌条件下将斜面菌种接入种子培养基，30℃，摇床160 r﹒min^-1，培养48h。发酵培养：将液体种子培养基接入发酵培养基中，摇床160 r﹒min^-1，30℃培养72h。

（2）发酵后的总状毛霉破碎，45℃水浴浸提1.5h，压滤取滤液，4℃条件下低温离心20min，获得含有β-葡萄糖苷酶的总状毛霉菌体；

（3）加入大豆异黄酮，每100mg大豆异黄酮添加50-250mg的总状毛霉菌体，在pH5.0-6.5，温度30-60 ℃的条件下水解2-4 h以产生游离型苷元。

进一步的，所述的步骤（3）中的水解时间为3.59 h，以期达到更好的水解效果。

进一步的，所述的步骤（3）中的pH为6.1，以期达到更好的水解效果。

进一步的，所述的步骤（3）中的总状毛霉菌体的用量为每100mg大豆异黄酮添加115mg的总状毛霉菌体，以期达到更好的水解效果。

进一步的，所述的步骤（3）中的水解温度46 ℃，以期达到更好的水解效果。

进一步的，上述的总状毛霉水解大豆异黄酮产生游离型苷元的方法，该方法包括以下步骤：

（1）总状毛霉的发酵；

（2）发酵后的总状毛霉破碎，45℃水浴浸提1.5h，压滤取滤液，4℃条件下低温离心20min，获得含有β-葡萄糖苷酶的总状毛霉菌体；

（3）加入大豆异黄酮，每100mg大豆异黄酮添加115mg的总状毛霉菌体，在pH6.1，温度46 ℃的条件下水解3.59 h以产生游离型苷元。

采用上述技术方案的积极效果：本发明提供了总状毛霉在水解大豆异黄酮产生游离型苷元中的新用途，酶解效率高，可用于制备大豆异黄酮的游离型苷元，为游离型苷元的制备开拓了一条新思路，具有广阔的应用前景。

具体实施方式

本发明中生物材料的来源说明：