[发明专利]天川颗粒中间产品特征指纹图谱构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用高效液相色谱方法建立天川颗粒中间产品的HPLC-UV标准特征指纹图谱，对天川颗粒生产过程中间产品水提浓缩液的质量进行监控，属于药物分析技术领域。背景技术

中风病是中老年人常见病、多发病，是老年人三大死因之一，具有发病、致残、死亡和复发率四高的特点，是威胁中老年人身体健康的主要疾病。近年来，全国、全世界发病率有增高趋势，心脑血管疾病已上升为死亡原因首位，全国每年大约有100万人罹患中风疾病，急性后期，往往遗留有诸多的后遗症，如偏瘫、痴呆、失语等，对病人及家庭和社会造成极大的痛苦和负担。遗留的后遗症，每年大约需治疗3～6个月。因此，在深入探讨风痰瘀血、痹阻脉络在中风病发病机理中的重要地位的基础上，拟平肝熄风、祛痰化瘀、活血通络之法，用天麻、川芎、怀牛膝和野葛根合理组方。根据《中药、天然药物注册分类及申报资料要求》的规定，开发成疗效可靠、服用方便、便于携带的天川颗粒。

研究表明，天麻具有抗惊厥，镇痛，改善微循环，抗缺血、缺氧和抗炎、增强机体免疫功能等作用。其主要提取物天麻素具有镇静、抗惊厥、抗癫痫、镇痛，增加脑血流量，改善椎基底动脉、小脑前下动脉、小脑后下动脉、迷路动脉及内耳供血不足，保护神经细胞，促进心肌细胞能量代谢的功能。葛根可以明显降低血压，减缓心率，降低心肌耗氧量，改善心肌代谢，抗心肌缺血，缩心肌梗死范围，可以显著扩张冠状动脉，改善微循环，还可以降低血脂和血糖。其提取物葛根素、葛根总黄酮等，可以明显扩张冠状血管，改善缺血区的心肌血供；可以抗血小板聚集，防治动脉粥样硬化，改善微循环，并通过影响细胞膜对K⁺、Na⁺、Ca⁺的通透性及影响儿茶酚胺释放，降低心肌兴奋性而发挥抗心律失常作用。

申请人对该天川颗粒，有一个在先申请，专利号CN200410036481.8；本申请是对该天川颗粒质量精制方法的进一步探索研究。

中药指纹图谱是指某种中药材或中成药中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或光谱的图谱。中药指纹图谱能比较全面地反映中药中化学物质的种类和数量，是实现中药真实性、质量可控性和产品稳定性的可行模式，能更好地反映中药的内在品质。随着中药指纹图谱及化学模式识别技术的发展，指纹图谱技术已日益成为国内外广泛接受的中药质量评价模式。基于定量指纹图谱技术的中药质量控制模式是以传统中医药理论体系为基础的综合控制模式，体现了中医药整体治疗的特色。定量指纹图谱技术在原有指纹图谱的方法上赋予指纹图谱大量的定性、定量信息共同应用于中药质量控制，对指纹图谱中多个目标成分尤其是有效成分进行准确定量，使中药尤其中药复方制剂质量控制更加准确，能更真实反映中药复方制剂的质量状况和产品组成，产品的质量和稳定性更加可靠。

发明内容

本发明的目的是提供一种天川颗粒的中间产品水提液特征指纹图谱的建立方法，以及由此方法得到的天川颗粒中间产品标准特征指纹图谱。本发明通过对天川颗粒中间产品水提液高效液相色谱指纹图谱的研究，提供了一种较好的质量控制方法，是天川颗粒及其中间产品水提液的质量控制更加完善和科学。

本申请所述的“天川颗粒中间产品”，是指按照申请人的在先申请CN200410036481.8规定的配量和制备方法，在制备天川颗粒过程中的醇沉前的药材混合水煎煮浓缩液。

实现本发明目的的技术解决方案为：

1.研制一种天川颗粒中间产品指纹图谱的建立方法，其特征是采用HPLC-UV法，包括如下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取天川颗粒中间产品密度为0.50～1.50g/ml水提浓缩液适量，精密量取，加水1～100倍稀释，混匀后，取少量上清液过0.45μm微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备：精密称取天麻素、对羟基苯甲醇、盐酸川芎嗪、对羟基苯甲醛、葛根素、大豆苷、阿魏酸、β-蜕皮甾酮、大豆苷元适量，分别用纯化水、纯化水、70%甲醇、纯化水、纯化水、甲醇、70%甲醇、甲醇、甲醇溶解成浓度分别为1mg/ml的溶液，再吸取对照品溶液各适量，用纯化水稀释成浓度分别为0.05μg/ml的对照品溶液；

（3）色谱条件：色谱柱为5μm Fortis-C₁₈，250×4.6mm：流动相为0.085%磷酸水溶液-甲醇；采用梯度洗脱方式0min→15min→17min→57min→70min→90min→95min，甲醇5%→10%→20%→40%→60%→70%→100%；流速0.5～1.5ml/min；柱温25～35℃；检测波长：220nm；进样量为10～100μl；