[发明专利]天川颗粒中间产品特征指纹图谱构建方法

权利要求书

1.一种天川颗粒中间产品指纹图谱的建立方法，其特征是采用HPLC-UV法，包括如下步骤：

⑴供试品溶液的制备：取天川颗粒生产过程中的中间产品密度为0.50～1.50g/ml的药材水提浓缩液适量，精密量取，加水1～100倍稀释，混匀后，取少量上清液过0.45μm微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液；

⑵对照品溶液的制备：精密称取天麻素、对羟基苯甲醇、盐酸川芎嗪、对羟基苯甲醛、葛根素、大豆苷、阿魏酸、β-蜕皮甾酮、大豆苷元适量，分别用纯化水、纯化水、70%甲醇、纯化水、纯化水、甲醇、70%甲醇、甲醇、甲醇溶解成浓度分别为1mg/ml的溶液，再吸取对照品溶液各适量，用纯化水稀释成浓度分别为0.05μg/ml的对照品溶液；

（3）色谱条件：色谱柱为5μm Fortis-C₁₈，250×4.6mm：流动相为0.085%磷酸水溶液-甲醇；采用梯度洗脱方式0min→15min→17min→57min→70min→90min→95min，甲醇5%→10%→20%→40%→60%→70%→100%；流速0.5～1.5ml/min；柱温25～35℃；检测波长：220nm；进样量为10～100μl；

（4）供试品溶液的测定：精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，以高效液相色谱法测定，得到天川颗粒中间产品水提浓缩液的HPLC-UV图谱。

2.按照权利要求1所述的天川颗粒中间产品指纹图谱的建立方法，其特征是按照本方法对10批供试品溶液和对照品溶液，注入液相色谱仪，以高效液相色谱法测定，记录色谱图，得到10批天川颗粒中间产品的HPLC-UV图谱，并进行分析比较，得到由测定所得的指纹图谱中有20个共有峰，其中，以3号峰即天麻素峰为参照物峰，分别为：

峰1：相对保留时间0.494，相对峰面积0.082；

峰2：相对保留时间0.569，相对峰面积0.085；

峰3天麻素：相对保留时间1.000，相对峰面积1.000；

峰4对羟基苯甲醇：相对保留时间1.603，相对峰面积0.164；

峰5盐酸川芎嗪：相对保留时间2.017，相对峰面积0.082；

峰6：相对保留时间2.217，相对峰面积0.057；

峰7：相对保留时间2.368，相对峰面积0.098；

峰8：相对保留时间2.409，相对峰面积0.430；

峰9对羟基苯甲醛：相对保留时间2.628，相对峰面积0.163；

峰10：相对保留时间2.667，相对峰面积0.772；

峰11：相对保留时间3.022，相对峰面积0.105；

峰12葛根素：相对保留时间3.228，相对峰面积1.927；

峰13：相对保留时间3.287，相对峰面积0.410；

峰14：相对保留时间3.376，相对峰面积0.568；

峰15：相对保留时间3.477，相对峰面积0.090；

峰16大豆苷：相对保留时间3.757，相对峰面积0.378；

峰17阿魏酸：相对保留时间3.926，相对峰面积0.091；

峰18：相对保留时间4.189，相对峰面积0.128；

峰19：相对保留时间4.256，相对峰面积0.260；

峰20β-蜕皮甾酮：相对保留时间5.410，相对峰面积0.067；

这些共有特征峰构成了天川颗粒中间产品指纹特征，图谱经《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件计算，相似度大于0.9；是天川颗粒中间产品标准指纹图谱。