[实用新型]一种从石蜡包埋组织中提取miRNA的试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型涉及一种提取miRNA的试剂盒，特别是一种从石蜡包埋组织中提取miRNA的试剂盒。

背景技术

miRNA是一段被编码的RNA，它在转录水平干扰特定基因的表达，影响蛋白的表达，和疾病关系密切。近几年被广泛研究并被重视。miRNA不同于mRNA，它有着不易被降解的特性，这就使得石蜡组织成为回顾性研究miRNA的重要宝贵资源。在10%中性福尔马林溶液中固定，石蜡包埋组织(FFPE)是医院和科研单位最常用的保存病理组织的一种方法，这给进行回顾性肿瘤生物分子miRNA研究提供了广阔的科研材料。因此，提取石蜡组织材料中的miRNA成为必要而且非常重要的环节。最近几年，国外关于提取miRNA的试剂盒产品不断出现并被简化，但提取方法和步骤仍然繁琐冗长，且进口试剂盒成本昂贵，提取效率也有差别，所得miRNA的产量及扩增效率也存在很大差别。鉴于以上这些问题不能很好满足国内大量标本的快速诊断和研究miRNA的应用，本实用新型在目前技术原理的基础上，结合miRNA的特性和实践经验，优化实验步骤，加快了提取速度，降低了其成本，有着重要的应用价值。

实用新型内容

本实用新型目的是提供一种从石蜡包埋组织中快速、便捷的提取miRNA的试剂盒。

为了实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是：

本实用新型的一种从石蜡包埋组织中提取miRNA的试剂盒，包括试剂盒本体，在所述试剂盒本体内盛装无菌离心管、RNA离心柱、脱蜡剂试剂瓶、无水乙醇试剂瓶、消化缓冲液试剂瓶、蛋白酶K试剂瓶、4M的NaCl玻璃瓶、80%酒精试剂瓶和无核酶水试剂瓶。

所述无菌离心管的大小为1.5ml。

所述消化缓冲液试剂瓶为含DNase I酶和250mL蛋白酶K缓冲液的试剂瓶。

其中，脱蜡剂可购置于上海宏兹生物公司。RNA离心柱可购置于天根生化公司。

利用本实用新型的试剂盒从石蜡组织样本中提取miRNA的主要步骤如下：

1）脱蜡：

将待处理的石蜡包埋组织切成厚度为10μm的组织片，取4片组织片置于无菌的1.5ml离心管内，加入lml脱蜡剂，漩涡震荡混匀，55℃水浴5分钟，室温条件下，12000rpm离心3分钟，弃上清；加lml无水乙醇，混匀，室温条件下，12000rpm离心3分钟，弃上清，重复操作1次，所得样品37℃空气干燥20分钟。

2）蛋白消化：

向步骤1）所得样品中加入150μl消化缓冲液（含DNase I酶）和10μl蛋白酶K（20mg/ml），56℃水浴20分钟；85℃，10min。消化液配方：蛋白酶K缓冲液250mL（1M Tris-Cl(pH8.0)2.5mL；0.5M EDTA(pH8.0)2.5mL；加水H2O至250mL）。

3）miRNA提取：

冷却后，继续添加4M的NaCl320μl，混合均匀，静止2分钟。然后加入1120μl无水乙醇，吹打均匀，过RNA离心柱，12000rpm，1min，弃上清，加80%酒精洗吹打均匀，12000rmp，601min。丢上清，室温，干燥30分钟，20μl无核酶水溶解。

4)纯化、收集：

加40μl的90℃预热的无核酸酶水，室温静置30分钟，12000rPm离心1分钟，反复收集一次，可以提高得率。

与现有技术相比，本实用新型试剂盒使用脱蜡剂进行脱蜡，无毒、无味道、对身体无害，而且miRNA提取及纯化步骤中由于采取了核酸盐析原理，使得步骤更为快速简捷。本实用新型的试剂盒减少了提取步骤、降低了成本，miRNA提取质量较好。

附图说明

图1是本实用新型试剂盒的结构组成示意图。

具体实施方式

为使本实用新型更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本实用新型而不用于限制本实用新型的范围，下列实施例中未提及的具体实验方法，通常按照常规实验方法进行。下面结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步说明，但不作为对本实用新型的限定。

实施例1：本实用新型的一种从石蜡包埋组织中提取miRNA的试剂盒的优选实施例